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植物類囊體膜及粒線體之無機焦磷酸水解酵素之純化與定性
Dissertation

植物類囊體膜及粒線體之無機焦磷酸水解酵素之純化與定性

江士昇
Doctor of Philosophy (PHD), 國立清華大學, 生命科學系
1997

Abstract

類囊體 粒線體 無機焦磷酸水解酵素 質子幫浦 輻射鈍化 功能大小 Thylakoid mitochondria inorganic pyrophosphatase proton pump radiation inactivation functional size
本論文旨在初探植物類囊體膜及粒線體之無機焦磷酸水解酵素, 概該酵素 在此二生物能量學上極重要的胞器內可能扮演重要之角色. 在第一部分, 利用界面活性劑溶解法, 硫酸銨分段沉澱分離法, 及數種快速蛋白質管柱 層析分離法, 菠菜類囊體膜上的無機焦磷酸水解酵素可被純化至電泳級之 均質純度. 此無機焦磷酸水解酵素為一分子量為 55 kD 之單體結構. 數 種特性, 包括受質專一性, 離子需求, 抑制劑敏感度, 及氨基酸組成等特 性均已被分析. 以此無機焦磷酸水解酵素為抗原, 亦可成功地自兔子體內 培養獲得其抗體, 而此抗體可抑制菠菜類囊體膜無機焦磷酸水解酵素的活 性, 但無法抑制著名的植物液泡囊膜之無機焦磷酸水解酵素的活性, 顯示 菠菜類囊體膜及液泡囊膜之無機焦磷酸水解酵素有不同的組成結構. 在第 二部分, 三種具不同分子量及不同所處位置的無機焦磷酸水解酵素(MPP1, 240 kD; MPP2, 100 kD; MPP3, 26 kD)可被從白化綠豆下胚軸的粒線體中 分離出. 而該種粒線體中含有焦磷酸水解酵素所支持的質子幫浦. 輻射鈍 化法亦被用來測定各種焦磷酸水解酵素及其所支持的質子幫浦的各別功能 大小. MPP1, MPP2, MPP3及焦磷酸水解酵素所支持的質子幫浦的功能大小 分別為 220 kD, 83 kD, 90 kD, 及 156 kD. 各種焦磷酸水解酵素的特性 亦被研究比較, 以探究何種粒線體焦磷酸水解酵素與質子幫浦有直接關 係.

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