Abstract
本研究探討影響Bacillus subtilis 原生質體轉形效率之一些條件，包括lysozyme處理時間，再生培養基種類，原生質體和質體DNA 和B．subtilis 1A297 配合質體pPL603b DNA 以及DM3-Starch再生培養基的轉形效率最高，可達6.9×106轉形菌株╱μgDNA 。但此轉形系統做為β－amylase 基因選殖之用仍有困難：在洋菜平板上許多轉形菌株菌落周圍透明環的形成並非由於β-amy1ase之作用所致，因為與碘液無紅色反應。若將DM3-starch再生培養基的starch以amy lose取代，則能克服轉形囷株透明環的干擾問題。DM3-amylose 再生培養基若不含有glucose ，則B。subtilis 1A 297轉形效率降低為3.8×104轉形菌株╱μg pHV14 DNA ，此可以靠添加2％ meat extract於再生培養基中而加以改善。為了簡化B。subtilis 轉形作用的繁複工作，本研究嚐試建立原生質體之冷凍保存方法。結果顯示B。subtilis 1A 297原生質體懸浮於含有15％glycerol之Sucrose-Maleate-MgC12 Penassay培養基中，於-80℃ 下冷凍保存50天之後，存活的原生質體仍能被DNA 轉形，其效率達1.2×105轉形菌株╱μg pHV14DNA ，足以勝任基因選殖之用。