Abstract
此篇研究論文的目標,是在探求以Calyculin-A(CL-A)處理9L細胞,因而 誘發GRP78基因活化的機制.Calyulin-A是一種蛋白質去磷酸脢形1(PP1)及 形2A(PP2A)的抑制物,它已經被使用為一種工具,來解開涉及蛋白質磷酸化 及去磷酸化之細胞代謝過程的調節。 在此,我們報導CL-A又發出分子量 78 KDa之葡萄糖調節蛋白(GRP78).9L細胞在1.0 nM CL-A處理之下,經過4 hr之後,GRP78的合成開始增強,然後在第12 hr之後達到最大量.同樣的, Slot blotting法分析顯示,在 1.0 nM CL-A處理下,grp78之mRNA會持續增 加,直至12 hr,達到最大值;此與前述CL-A誘發GRP78生合成,在時間上非常 吻合,顯示出GRP78之合成其調控位置在轉錄階層.在GEL Retardation反應 分析當中,與控制組比較,從CL-A 處理的細胞中製備而來之細胞核抽取物, 與從大白鼠得來之含有CRE-like單元(TGACGTGA)的去氧核糖核酸序列相反 應時,會展現增強的見節活性.移除CL-A之後,此CRE-like複合物(CRE-like 單元與核抽出物蛋白因子所形成之複合物)將會解離.除此之外,我們可以 觀測到CL-A會增強PKA的活性,且在1.0 nM CL-A處理4 hr後,PKA的活性達 到最大值. 以上結論顯示,在CL-A誘發GRP78生合成的過程中,CL-A首先 抑制PP1及PP2A的作用,而使PKA活性增強,導致CREB磷酸化增強,而使結合 在CRE-like 單元之CREB增多,而激活grp78,進一步誘發GRP78之生合成.