Abstract
Kazal 型絲胺酸蛋白脢抑制因子（SPINKs）屬於小分子蛋白酶，具有保守的Kazal區域。在不同的組織中，這些SPINK抑制因子被認為對蛋白質的分解有阻礙作用。在此類型的抑制因子家族中，我們對SPINK2及SPINK4的認識較少。SPINK2可能抑制胰蛋白酶並且對生育能力有影響，而SPINK4的生理功能尚不清楚。在這篇研究中，我專注於SPINK2及SPINK4的功能和結構分析。一開始我們選用四種常見的蛋白酶，包括trypsin, □-chymotrypsin, elastase and subtilisin A，來測試SPINK2及SPINK4的抑制能力。除了elastase之外，SPINK2對其他三種蛋白脢都有抑制能力，特別是對trypsin有很強的抑制能力，SPINK2與trypsin作用的IC50約為0.1 □M。SPINK4則顯示了對於subtilisin A 及□-chymotrypsin的抑制能力，我們所知SPINK4與subtilisin的作用尚未被研究，這提供了我們的之後研究的線索。在此同時，我也使用定點突變以及抑制反應的實驗來檢驗SPINK2活性區的P1’以及P2位置。綜合比較前後的實驗，結果發現當P1’位置上原本的His被置換成Glu或Ala時，此突變對於trypsin的抑制能力有明顯的減少，這顯示了P1’位置在SPINK2的功能上有重要的影響。