Abstract
本論文分為兩部份, 第一部份是有關DNA末端結合蛋白缺失且抗輻射細胞株之分離方法與特性分析, 第二部份則是有關Ku蛋白質在兩個具有同源末端之DNA分子間轉移的特性, 在第一部份的實驗中, 我們將xrs5細胞以UV照射使其誘變後, 再以4Gy的X-ray照射三次, 同時每次照射後讓細胞生長兩天再進行下一次照射, 經過這些處理後, 我們得到了兩株具有DNA末端結合活性缺且抗輻射特性的細胞株, 分別命名為M1與M2, DNA-PK是目前唯一已知與DNA雙股斷裂修補(DNA DSB repair)有關的蛋白質, 因此我們可以利用這些DNA末端結合蛋白缺且抗輻射之細胞株找出其他與DNA雙股斷裂修補有關並拌演著重要角色的蛋白質, 我們發現M1與M2在DNA雙股斷裂修補方有很好的效率並且在經過X-ray照射後所產生的G2/M停滯(G2/Mblock)是可以回復的, 這些特性與CHO-K1是相似的, DNA-PK活性的缺失則是與xrs5細胞相同的, M1, M2經過低劑量(12.5-100uM)及長時間(7天)的HYDROXYUREA(HU)處理後表現出與xrs5相同對HU是敏感的, 在這兩個突變中對HU的敏感表現型指出: UV誘變的確影響到某個己確認的基因座, 並且這兩個突變不是因為其他許多不同性狀改變而回復得來的, 在第二部份,我們設計了許多有不同末端結構的DNA探針來研究Ku蛋白質在兩個DNA分子間的轉移, 由於Ku蛋白具有辨認DNA末端之特性, 且與DNA重組及修復有極大的關係, 所以了解Ku轉移時所必須的條件對我們而言是很重要的, 我們使用競爭性偏移凝膠分析(competitive gel shifting assay)觀察Ku蛋白轉移的特性, 住而發現當Ku蛋白與DNA分子結合後合後可以直接的移動到另一個DNA分子上, 而這兩個DNA分子間的同源末端必須具有至少二個以上完全互的鹽基, 而同源末端間缺口(gap)的位置也會影響Ku蛋白的轉移.