Abstract
大白鼠細胞增生核蛋白抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)基因的5'-flanking region在1992年被日本人KeiFujinaga等定序完 成, 並作了初步有關啟動子(promoter) 活性的研究, 他們發現具有啟動 子功能區域位於-240∼-82 bp 之間, 而-692∼-240 bp 具有調節活性 (正, 負向)。本篇論文著眼於此段啟動子的功能區。利用大白鼠再生力橿 強的肝作為活體增生細胞系統, 由於再生肝的不同時期即代表著細胞週 期(cell cycle)的不同時期, 而細胞核內的轉錄因子(transcription factor)可能就是調控該基因的表現。藉著 mobility-shift analysis可 找到特定的 cis-acting element或轉錄因子。 簡言之, PCNA 基因的啟 動子功能區以限制□(restrction enzyme )切割成兩段(HpaII/Xba/I 188bp; XbaI/XbaI 200bp),或人工合成的 oligo-nucleotide, 再以放射 性 32P 標定作成探針, 據此和各個不同時期再生肝萃取出的細胞核蛋白 孵育,經電泳即可找出能與上述DNA 探針結合的細胞核蛋白。實驗結果顯 示大白鼠肝的細胞核萃取液含有 DNA 分解酵素 (DNase I), 所以必須將 孵育緩衝液加以適當調整(加入Zn++, 去除Mg++), 此外,轉錄因子Sp1對 於肝再生時PCNA表現扮演著某種特殊的角色(0,2 hr的表現量均遠高 於1,3,7, 12 hr 的表現)。