Abstract
由於酵素具有高專一性、高反應性、高立體選擇性等優點，近年來利用酵素進行非對掌異構物之光學分割研究因而廣為受到重視，而酵素固定化技術的進步也使酵素的應用更具高穩定性和可重複使用性。所以本研究藉由專利菌株Pseudomonas fluorescens IFO 12055 所獲得的細胞內脂肪酵素lipase，固定化於自行製備之聚甲基丙烯醯胺共聚物擔體上，進行反應物 MAMP（Methyl-3-Acetylthio -2-Methylpropionate）酯鍵位置的水解反應，希望藉由不同反應條件的探討，能製備出高光學純度的產物 S-AMPA（Acetylthio-2 -Methylpropionic acid）（抗高血壓藥物 Captopril之前驅物）。 實驗結果發現將lipase共價鍵結固定化於具孔洞性的聚甲基丙烯醯胺共聚物擔體上時，於50℃、pH＝7.6具有極佳的長時間熱穩定度（20天後仍具有原活性的80%以上），且進行20個批次反應的操作，亦能維持80%的活性與高光學純度的表現。然而實驗發現，高濃度的MAMP不能完全分散溶解於水溶液中，導致固定化酵素活性的抑制，因此使用不同溶劑或添加界面活性劑作為改善的方法。此外實驗上亦發現，反應基質MAMP會有自然水解的現象；產物AMPA在水中會做進一步的醇解反應，並且酵素會受到酸性產物生成所造成的pH值下降而有失活的現象，這些都會影響到產物S-AMPA的光學純度與產率。所以本實驗目的在於尋找提高MAMP濃度的方法，以及求出各反應機構的速率常數，希冀藉此得到S-AMPA的大量化生產。