Abstract
本實驗目的在於研究 Psoralen 核酸雙股間鍵結物 (crosslink)在具正常修補能力的人類成纖細胞所造成的突變特異性。 將細胞暴露在 4-12μM的8-methoxypsoralen，隨後以波長365nm，能量60J/m2的紫外光(UVA)照射，然後將未共價鍵結的 8-MOP洗去 (PUVA-I)，再以能量 2160J/m2 的UVA作第二次的照射處理 (PUVA-II)。 8-MOP及 PUVA-I，幾乎對細胞沒有毒性， 但PUVA-II處理造成顯著毒性及誘發細胞中 hprt 基因突變頻率，在D37濃度時約增加十倍。單離出 36個互不相關的 PUVA 突變株中， 利用訊息核醣核酸-聚合酵素鏈反應 (mRNA-PCR) 的方法大量複製 cDNA，接著進一步作 DNA 的定序 (sequencing) 來探討 hprt 基因上突變的種類及其分佈在基因上之位置。結果發現，17個突變株是單一鹼基取代(base substitution)，其餘19個突變株的cDNA有部分或整個exon的缺失(deletion)，或多個 exon 的缺失，或得到部份 intron，此可能為intron-exon 連接處發生突變而造成的編結 （splicing）突變株。 於是利用 DNA-PCR複製 hprt 基因的技術， 分析10 株這種疑似 mRNA 編結錯誤而導致 exon 缺失的突變株以探討其 DNA 上為鹼基取代或其他種類的突變。其中9株的 splicing提供(donor)或接受 (acceptor)位置的特定序列上發生單一鹼基的取代， 另外一個突變株其 exon 8 內的二個鹼基被取代，然而其編結位置是完好的。幾乎所有的突變株(24/29)其鹼基的取代發生在 T•A的配對上。主要的突變發生在 5'TA 或 5'ATA的胸腺嘧啶 上。 此外，突變的發生與 TA位置的5'端的鹼基有很大的關係。13/16 的突變符合了細胞優先切除轉錄股上的雙股鍵結物的理論，以及translesion repair 合成時短暫配對錯誤-重新配對 (misalignment-realignment) 的模式。