Abstract
在白化綠豆幼莖的粒線體中, 發現一種焦磷酸水解酵素( Pyrophosphatase),可以執行質子幫浦功能. 本篇論文的目的, 即在探討 這種焦磷酸水解酵素的純化. 首先我們從白化綠豆幼莖中分離出粒線體, 再利用冰冷丙酮將焦磷酸水解酵素, 從粒線體的內膜中萃取出來. 萃取液 中含多種蛋白質, 須經幾個步驟才可將焦磷酸水解酵素純化出來, 這些 步驟包含陰離子交換樹脂(DE-52及Mono-Q column), 與分子篩( Superose-12 column).在分子篩這步純化步驟中, 可以估計焦磷酸水解酵 素的分子量. 這是利用蛋白質分子在分子篩中流動速率, 與分子量的線性 關係所求得的. 焦磷酸水解酵素的分子量在此估得約 120 kDa. 另一方 面, 純化後的焦磷酸水解酵素跑電泳(含SDS),所得的分子量約 58 kDa.從 這些結果判知, 綠豆莖的粒線體中發現的焦磷酸水解酵素, 可能是一種 含兩個 58 kDa 分子的同分子雙體 (Homodimer).在純化過程中, 尚可發 現另一種焦磷酸水解酵素. 它是一種 35 kDa 的單體分子(Monomer).而且 此一單體分子可在清洗過程中被去除掉. 因為清洗過程之中, 不加入任何 融解劑(Detergent) 或用超音波震盪(Sonication). 因此這種單體分子應 是游離態的酵素分子, 而非鑲在膜上的酵素分子.會執行質子幫浦的焦磷 酸水解酵素, 應是屬於鑲在膜上(Membrane-bound)的酵素分子. 所以在本 論文中只探討膜上的酵素分子之純化.