Abstract
在本論文中，我們針對kinase FA╱GSK-3 （一種脯氨酸引導的蛋白質磷酸化酵素）的活性調控機轉與癌細胞增殖之間的關係進行研究。我們以不同的酪氨酸磷酸化酵素抑制劑，低劑量短時間處理人類攝護腺癌細胞PC-3，透過抑制不同類型酪氨酸磷酸化酵素的活性，配合抗FA╱GSK-3 抗體免疫沈澱法及高專一性活性分析，結果發現genistein，apigenin，quercetin，kaempferol，herbimycin A可對kinaseFA╱GSK-3 的活性產生不同程度的抑制。進一步以西方雜合法及磷酸酪氨酸含量分析，發現受藥物處理的細胞中kinase FA╱GSK-3 蛋白含量並不改變，但其磷酸酪氨酸含量隨著其活性的下降而減少，說明了genistein等藥物所抑制的酪氨酸磷酸化酵素是透過去磷酸化kinase FA╱GSK-3 的磷酸酪氨酸而降低其活性。又genisteinapigenin，quercetin，kaempferol等藥物為flavonoid一類，而herbimycin A則可抑制非受器型酪氨酸磷酸化酵素（non-receptor type tyrosine kinase）。綜上所述，我們發現kinase FA╱GSK-3 上游的酪氨酸磷酸化酵素可能屬於non-receptor type╱flavonoid-sensitive tyrosine kinase。另一方面，本論文更進一步深入研究kinase FA╱GSK-3 與癌細胞增殖過程的關係。結果發現當PC-3細胞中kinase FA╱GSK-3 的活性受到前述藥物抑制時，癌細胞的增殖能力也會在短時間內受到抑低，且二者降低的比率相互吻合並與用藥劑量成正比關係。反之當PC-3細胞受daidzein，compound 5，tyrphostin A25，lavendustin A，aminogenistein等藥物處理時，在不影響kinase FA╱GSK-3 活性的狀況下，癌細胞的增殖能力在短時間內亦無顯著改變。我們更發現genistein這類藥物對kinaseFA╱GSK-3 的作用及抑制癌細胞的增殖能力也發生在不同細胞株，如人類攝護腺癌細胞LNCaP及表皮癌細胞A431中，表示此非特殊現象，更增加了其可靠性。由於最近的研究發現kinase FA╱GSK-3 在多種癌病組織中有隨著惡化程度而過度表現的現象，而被懷疑是個引發癌細胞增殖因子（Lee et al,1995;yang et al,1995b;yang et al,1996）。因此綜上所述，種種結果顯示出，藥物可能透過抑制non-receptor type╱flavonoid-sensitive tyrosine kinase（s)，使癌細胞中過度表現的kinase FA╱GSK-3 的酪氨酸去磷酸化去活化，再透過訊號傳遞很快也造成癌細胞增殖速率的降低，確認了kinase FA╱GSK-3 與細胞增殖間的關聯。因此本論文不但在kinase FA╱GSK-3 的訊號傳遞調控機轉上有所突破，更顯示只要抑制癌細胞中過高的kinase FA╱GSK-3 的活性，便能在短時間內有效地抑制癌細胞的增殖，希望能提供臨床上有效治療癌病一個重要的訊息。