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Trichodermakonqii W-10 纖維分解酵素之分離輿其相乘效應研究
Thesis

Trichodermakonqii W-10 纖維分解酵素之分離輿其相乘效應研究

胡清華
Masters, National Tsing Hua University
1980

Abstract

纖維分解酵素分離相乘效應分解酵素活性分子生物學生物學 TRICHODERMAKONQII- W-10MOLECULAR-BIOLOGYBIOLOGY
Trichoderma boningil W-10 是自台灣土壤中分離得之一具高纖維分解酵素活性之真菌菌種,自此菌種的固體培養所萃取之粗 中可分得三種纖維分解 之組成酵素,其分別為外解型-β-1.4-糖鍵分解 (exo-β-1.4-qlueanase, C ),內解型-β-1.4-糖鍵分解 (endo-β-1.4-qlucanase, Cx) 與β-葡萄糖分解 (β-qlucosidase),其分離之方法包括利用硫酸胺(ammonium sulfate)沈澱法,DEAE-Sephadex, DEAE-Cellulore 成SP-Sephadex 等的離子交換層析及Bio-Gel P-100 的分子篩層析,利用此方法可得到純化的酵素,并可自膠凝電泳決定其分子量,分別為Cx: 51,000; C :28,000; β-qleuosidase��74,000。無論β-qlucosidase或Cx均對離子型清潔劑SDS敏感,且不需金屬離子活化其酵素活性,事實上,有些金屬離子如鐵離子(Fe ) ,汞離子(Hg ) 等等,在50mM濃度時會抑制酵素之活性。此三種的纖維分解 組成酵素,彼此間之活性具有相乘效應。與Tridroderma 屬其他菌種相似,Cx與β-qlucosidase的酸鹼度活性範圍均位於酸性中,其最適當酸澗度及溫度分別為5,65℃及4,68℃,其對溫度之適應性及酸鹼適應性相似,β-qlucosidase終產物 (葡萄糖) 對酵素活性的抑制性,吾人亦曾加以研究。自其結果顯示,Ki值永遠大於Km值,其他多種單糖如2-去氧-葡萄糖,6 -去氧葡萄糖,α-甲基化葡萄糖,木糖,半乳糖,阿拉伯糖等均對β-qlucosidase之活性不具任何影響。

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