Abstract
先以 SP-Sephadex C-25 管柱及高效能液相層析儀， 可從臺灣雨傘節(Bungarus multicinctus） 蛇毒中， 純化出五種 β-bungarotoxin(β-Bgt)。 再利用融合瘤技術， 對β1-Bgt 製備出23 株穩定的單株抗體。 然後藉由 Dot blotting 可知 mAb-3, mAb-11 及 mAb-14 單株抗體所認識的抗原決定基為立體構型， 其餘的單株抗體則認識直線構型抗原。 其中 mAb-2, 6, 11, 13, 19, 21, 22 單株抗體抑制酵素活性75% 以上， 而 mAb-8 單株抗體抑制 β1-Bgt 的磷脂■酵素活性更達96%， 皆與抗體中和毒性能力之間具密切的關係。 再根據西方點墨法得知這些能抑制β1-Bgt 酵素活性及中和毒性的單株抗體的抗原決定基皆位於 A 鏈上。 另外， 以酵素免疫吸附法得知， 這些 β1-Bgt 的單株抗體亦可和其餘四種 β-Bgt 有高度親合力， 但對 notexin,notechis Ⅱ-5, PLA2, DE-Ⅰ 及 CMS-9 則無親合力。接著， 利用合成胜■及蛋白水解■水解 β1-Bgt， 可定出具有抑制酵素活性及毒性之單株抗體之抗原決定的位置。 β1-Bgt 的A 鏈氮端， A 鏈上的序列 31至 37, 46 至 51, 91 至 98 以及 100 至 106對 β1-Bgt 的生物活性有重大關聯性。 經過多組單株抗體配對並等量混合， 發現某些抗原決定基空間距離較遠的單株抗體間， 對抗原分子的親和力常數及生物活性之抑制有增加的趨勢； 相反地， 對於抗原決定基空間距離較接近者， 則有相反的效果。進一步， 結合 Flow cytometry 及細胞融合的技術， 將螢光標定能產生 2 號及 6 號單株抗體的融合瘤進行融合。 所得到的二度融合之融合瘤， 可產生出同時具有 IgG1, IgG2b 重鏈的雙專一性單株抗體，這種複合式抗體， 可專一的與 A 鏈序列 46 至 51 及 100 至106 結合， 並且對 β1 及 β2-Bgt 有較強於 β3, β4 及 β5-Bgt 的結合能力， 但是， 對於 PLA2, DE-Ⅰ, CMS-9, Notexin 及 NotechisⅡ-5則毫無結合功能。 尤其此種雙專一性單株抗體的親合力常數高達4.5 x 1010， 為單專一性單株抗體的 45 倍， 在抑制 β1-Bgt 的酵素活性達 98%， 並且能完全中和 β1-Bgt 的致死毒性。 但比較單專一性及雙專一性單株抗體的單一抗原結合鏈的親合力時， 卻發現它們任一個抗原結合鏈的親合力常數幾乎相同。 這或可解釋為雙專一性單株抗體在與毒蛋白抗原作用時， 先以其中一鏈結合抗原， 造成抗原構形的改變以利於另一鏈與抗原做結合， 藉此提高親合力常數及抑制毒蛋白的生物活性。