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中國倉鼠卵巢細胞之金屬硫蛋白基因及其起動子之結構分析
Thesis

中國倉鼠卵巢細胞之金屬硫蛋白基因及其起動子之結構分析

洪淑嫻
Masters, National Tsing Hua University
1991

Abstract

倉鼠卵巢細胞硫蛋白起動子
金屬硫蛋白是一種低分子量,富含半胱胺酸的蛋白質,它對重金屬有很強的親和力,因此被認為和細胞中重金屬的解毒,以及微量金屬鋅、銅的代謝有關。在哺乳類動物中,這個蛋白質大致可歸類成二種異構形MT-I和MT-II ,且此二者在相同細胞中均可受到鋅、銅、鎘等金屬不同程度的誘導。中國倉鼠之兩種異構金屬硫蛋白的cDNA已被定出,它們在序列結構上顯示出高度的演化保留性。為了研究CHO MT-II的基因結構(genomic structure) ,以及探討其起動子的特性,我們構築了中國倉鼠卵巢耐鎘細胞(CHO Cdr cells )的基因庫,並利用CHO MT-II cDNA作為探針,栓選出CHO MT-II DNA 和其基因上游部分。經過DNA 定序,得知 MT-II和其起動子的基因結構。此基因共有三個表現序列(exon)和二個插入序列(intron),而和其它種類比對的結果,也找出位落在基因上游區域 (5' flanking region),數個疑是調節性蛋白質的結合位置。轉錄始點亦從序列分析中找出,並進一步由primer extension實驗所證實。為了能更深刻了解起動子的特性,次選殖出起動子部分,作CAT (chloramphenicol acetyltransferase) 活性的分析。然而,所選殖的MT-II 起動子,雖然包括所有可能的MRE,但在我們的實驗□,似乎不能表現CAT基因,也不能被鎘或鋅所誘導。這個結果需要進一步的研究才能證實。

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