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人類酸性纖維母細胞生長因子-去氧核糖核酸錯合物結合作用力之探討
Thesis

人類酸性纖維母細胞生長因子-去氧核糖核酸錯合物結合作用力之探討

李 軒
Masters, 國立清華大學, 化學系
2000

Abstract

人類酸性纖維母細胞生長因子 去氧核糖核酸 Human Acidic Fibroblast Growth Factor DNA 15N Select / Fliter NOESY Experiment DNA Binding Protein
人類酸性纖維母細胞生長因子(Human Acidic Fibroblast Growth Factor,簡稱hFGF-1)是由154個胺基酸組成的β-barrel protein,可誘發中胚層與神經外胚層細胞的增生並具有血管增生活性。由於hFGF-1缺少一段訊息序列以致無法經由正常的內質網-高爾基器路徑來分泌,因此只能經由與特定的細胞表面受體作用而引發一連串的訊息傳導,進而誘導細胞增生,此一路徑是我們目前比較清楚了解的;但是有研究發現hFGF的另有一個分泌路徑,因為FGF的氨基酸組成具有一段Nuclear Translocation Sequence (NYKKPK,簡稱NLS),可帶領外源性的FGFs穿越細胞膜並進入細胞核中調節DNA的轉錄過程,但是目前對於此一分泌路徑的研究還不是非常清楚。Smith等人在1997年時證實FGF-2可與一段特定序列的單股DNA (5’-GCGGGGCTATGTAAATTACTGCTGTACTCAGC-3’)作用並且發現此單股DNA明顯地抑制hFGF-2的血管生成活性而可作為其抑制劑,因此我們利用此一特定序列的單股DNA並將其再細分為另外3段較小的斷片,分別是1~16 mer、17~32 mer與9~24 mer再加上原本的1~32 mer,共4段單股DNA研究它們與hFGF-1之間的作用,藉以了解彼此在生物體內所可能扮演的角色,例如1~16 mer是否能作為hFGF-1的抑制劑,這可在藥物設計方面提供相當程度的訊息。 結果發現hFGF-1確實會與單股DNA作用,尤其是1~16 mer,經由核磁共振技術的研究證實hFGF-1與1~16 mer作用的結合位約在K114至K142殘基之間,因為在此範圍內有許多帶有正電的殘基可與主要由帶有負電的磷酸官能基組成主幹的單股DNA形成電荷作用力而結合,而且利用表面薄膜共振實驗發現其解離常數為10-6 M。

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