Abstract
過去在血管新生的研究中，多為利用組織切片得到平面相關資訊，如此僅能觀察到局部的現象。為了得到更清楚的立體空間結構證據，因此在本實驗中，我們使用了共軛焦雷射掃瞄式顯微鏡術重建新生血管的內部結構，做進一步的觀察。本研究主要的目的是，觀察bFGF與從中藥〝人蔘〞裡萃取純化出來的非蛋白質類新型血管增生因子ginsenoside Rg1 (Rg1)，在體內促進血管新生的情形。實驗裡以能表現綠色螢光的基因轉殖鼠做為實驗動物，並利用共軛焦雷射掃瞄式顯微鏡技術以3D影像重建血管新生情況，觀察血管新生情形。 本研究主要分為體外實驗以及體內實驗兩部分進行探討。在體外實驗部分，我們以細胞培養測試的方式，評估在37℃下保存不同天數的bFGF以及Rg1對人類臍帶靜脈內皮細胞(HUVECs)增殖能力的影響。當bFGF於37℃下保存的天數越長，對於HUVECs增殖能力下降越明顯；而Rg1在37℃下保存30天的過程中，其對於HUVECs增殖能力沒有明顯的差異。 第二部分的體內實驗裡，我們將bFGF與Rg1和growth factor reduced matrigel均勻摻混，接著注射入老鼠腹部皮下形成plug，於不同時間點取樣觀察bFGF與Rg1對於誘導生物體內血管新生的影響。實驗裡，分別在注射後第1、4、6、8個星期進行取樣，分析方法分為三部份：共軛焦雷射掃瞄式顯微鏡術分析、病理組織切片分析、血紅素含量分析等。以共軛焦雷射掃瞄式顯微鏡術觀察matrigel plug內的血管新生情形，將新生血管的螢光以立體空間方式完整重建；利用病理組織切片評估免疫反應，並且以Image Pro® system計算matrigel plug內血管新生的密度、滲入深度及脂肪細胞滲入深度。 我們不僅由常用的組織切片獲得平面相關資訊，而且能夠利用共軛焦雷射掃瞄式顯微鏡術做為觀察matrigel中新生血管生長情況，將新生血管以螢光方式重建成具有立體空間結構的影像，獲得更具體的血管新生空間分布的證據。 本研究同時也觀察到，無論是bFGF或者是Rg1，用以體內促進血管新生時，只要當生物組織再生達到一定程度時，初期經由血管增生因子所誘導的多數新生血管開始進行血管萎縮的調控，將新生血管數目調整為再生組織所需要的新生血管數量。 上述的實驗結果顯示，我們成功建立以共軛焦雷射掃描式顯微鏡術觀察血管新生的技術，突破傳統組織切片獲得的平面相關資訊，得到新生血管在植入材料中的分布情形，獲得更具體的證據。