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以化學交聯法探討在豬腦中AMPA受器之四級結構
Thesis

以化學交聯法探討在豬腦中AMPA受器之四級結構

周耀民
Masters, National Tsing Hua University
1999

Abstract

AMPA受器四級結構 AMPA receptorstoichiometry
AMPA receptor主導哺乳動物中樞神經系統中快速興奮性神經傳遞(fast excitatory neurotransmission),同時亦參與了學習與記憶的分子機轉。雖然AMPA receptor在分子學上的研究已有很大的進展,但對其生化與結構特性的了解則較少,尤其是有關AMPA receptor四級結構相關研究上仍有很大的爭議,以生化相關研究為例,對於AMPA receptor四級結構是由四或五個次單元(subunits)組成都有其支持的證據。為釐清生化方面相關研究之爭議,我們利用四種不同分子大小、特性的化學交聯試劑,分別為2-IT(2-Iminothiolane)、DMS(dimethyl suberimidate)、DST(Disuccinimodyl tartarate)、SADP (N-succinimidyl-4-azidophenyl-1,3'-dithio propionate),由豬腦中分別純化出經Triton X-100處理的 SJ(synaptic junction)與未經Triton X-100處理的SPM(synaptic plasma membrane)作為實驗材料,以進一步探討AMPA receptor四級結構以及是否含有membrane associated protein特性次單元的可能性。在2-IT及DMS處理下,可明顯辨識出AMPA receptor是由四個分子量約為100kDa的次單元所組成,而在DST及SADP實驗方面,由於背景值(background)過強無法辨識dimer 分子量以上的蛋白,故無法作進一步的比較。另外比較2-IT及DMS實驗中,SPM與SJ之間並沒有明顯的差異,顯示並沒有任何membrane associated protein特性的次單元存在的可能。由以上結果,我們認為AMPA receptor四級結構由四個次單元所構成且不具有membrane associated protein特性次單元存在。

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