Abstract
用化學修飾藥物，四硝基甲烷(Tetranitromethane, TNM)，研究白化綠豆幼苗的下胚軸細胞內液泡上ATP 水解酵素中涉及活性的酪胺酸(Tyrosine)殘基，以便進一步了解此水解酵素的功能與結構。我們發現不同酸鹼(pH)值會使四硝基甲烷對脫離液泡膜的ATP 水解酵素活性的作用程度發生變化，在pH=6.5時，活性抑制30﹪，而pH=9時活性抑制85﹪，我們再用兩種不同環境下的ATP 水解酵素的活性，一為存在液泡膜(Tonoplast ATPase)上，二為脫離液泡膜(solubilized ATPase)後分解ATP 的活性以及其在膜上執行氫離子傳送進膜內(proton translocation)活性。以水解酵素百分比對不同作用濃度的四硝基甲烷做圖，得到三種抑制50﹪活性的TNM 濃度值（Ｉ50）各為0.85，0.11，0.58nM。由在膜上的Ｉ50值比從膜上分離後大，顯示脂質雙層影響TNM 接近與酵素活性有關的酪胺酸殘基，或者是分離後必要的酪胺酸殘基易受TNM 的攻擊的結果。另一方面膜上水解ATP 的活性受TNM 的影響程度與其行使質子運送的活性受TNM 的影響程度並不一致（後者受影響程度較大），可能是兩種功能並非一致的聯合在一起。我們亦發現在ATP 水解酵素的受質，ATP ，並不能保護TNM 的抑制作用，意味著TNM 的修飾位置可能不在核甘酸(nucleotide)結合位置，化學修飾的定量分析得到每一個ATP 水解酵素有三個TNM 分子與它作用。再利用曹氏公式的最佳直線分析發現，三個修飾的分子中，其中只有一個作用位置參與酵素水解ATP 的活性反應。再由蛋白質內部螢光放射實驗發現被修飾的酵素，其酪胺酸的殘基處於部座落在較親水的環境中。