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以往復式介電泳提升專一性T細胞捕捉效率之研究
Thesis

以往復式介電泳提升專一性T細胞捕捉效率之研究

朱夏志
Masters, 國立清華大學, 工程與系統科學系
2008

Abstract

專一性T細胞 往復式介電泳 細胞免疫捕捉 螢光染色 Specific T cell reversible DEP technique cell immuno-capture fluorescence staining
本研究首次提出以周期性往復式弱介電泳(DEP)技術來提升混合細胞中專一性細胞的捕捉效率。正向介電泳將緩慢引導懸浮液中的細胞與固定化於聚酯纖維膜(PVDF)上的生物探針鍵結。實驗結果顯示出使用正向介電泳的細胞捕捉效率比沒有使用的效率高兩倍。在混合細胞實驗中,當非專一性細胞比專一性細胞數量高10倍以上時,捕捉效率將會下降,推測下降原因為當介電泳施加時,大量的非專一性細胞佔用了鍵結位置,妨礙目標細胞與抗體鍵結。為了改善混合細胞中專一性細胞的捕捉效率,本研究嘗試使用一種可逆式介電泳技術。圖形化的同心軸上電極,可以任意替換供電面積大小。首先,使提供一個正向的介電泳場,接下來改變上電極使部分電極給電,使其產生一個可逆式的介電泳場。反向介電泳將重新分佈懸浮液中未被鍵結的細胞,使專一性細胞有機會再與探針反應。接著把介電泳關閉時,未鍵結的細胞將會被緩衝液沖洗掉。往復式介電泳的設計可以再促進效率提高約25%。反應完後使用螢光顯微鏡擷取捕捉細胞螢光影像圖,並使用影像分析軟體計數。此技術可應用於檢測人體血液中少量的專一性細胞,並可在短時間內(~1小時)進行大量的陣列平行檢測,將有助於未來疫苗開發。

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