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以輻射鈍化進行大腸桿菌腺核 三酸水解 之功能分析
Thesis

以輻射鈍化進行大腸桿菌腺核 三酸水解 之功能分析

馬菁田
Masters, National Tsing Hua University
1990

Abstract

輻射鈍化法大腸桿菌離子通透劑去偶合劑功能單位螢光消失現象質子移入偶合因子 (RADIATION INACTIVATION)(IONOPHORE)(UNCOUPLER)(FLUORESCENCE QUENCHING)(PROTON TRANS LOCATION)(PROTON CHAMNEL)
利用輻射鈍化法(radiation inactivation)可進行大腸桿菌腺核 三磷酸水解 (F F-ATPase) 之功能分析。在膜上和溶離下之腺核 三磷酸水解 的水解功能單位各為300±24 kDa (仟道爾吞) 和295±17kDa;當離子通透劑(ionophore) 或去偶合劑(uncoupler) 存在下,例如gramicidin和FCCP,功能單位增加至380±9kDa 和360±17kDa。利用valinomycin 和KCL 同時存在的狀態下,功能單位便降低至280±17 kDa 。利用acridine orange 之螢光消失現象(fluorescence quenching)可探討質子移入(proton translocation)所參與之功能大小為355±15kDa。將照射處理之偶合因子O(ECF ) 進行重組實驗,可計算出質子通道(proton channel)所提供之功能單位為96±6kDa。腺核 三磷、無機磷酸根交換作用是由於腺核 三磷酸水解所提供的電化學質子梯度之能量,使反應溶液中的腺核 二磷酸被再次氧化磷酸化;腺核喿三磷酸水解在此反應所提供之功能單位大小為290±25kDa。腺核喿 磷酸水解 的水解功能單位在單一位置(uni-site)及多重位置(multi-site)之下分別為200±22kDa及298±22kDa,此二者所顯現之差別98±44kDa 代表的意義是:平衡狀態水解反慶時,三個β次體(Mr=52,000) 皆需參與。

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