Abstract
擷抗層析電泳法利用兩種不同的膠體，填充在電層析管柱之中，使蛋白質得以不同的對流速度在上下層移動；同時，若在管柱中施以一適當大小和方向之電場，使蛋白質額外獲得一電泳速度，足以克服下層之對流速度往上逆流，而卻無法超越上層較快的對流速度；如此，蛋白質之淨位移方向將指向中央界面並聚集形成一平衡帶，而與其他蛋白質分離。由於擷抗層析電泳法具有高解析度和與層析法相當的處理量，發表之初，立即引起相當大的重視；然而卻因為儀器設計與操作上諸多問題的限制，使此一原理之進展一直很緩慢，而至今也尚未有實際的純化應用出現。在本論文中，一項新穎的儀器設計，J-Column，利用補給新鮮緩衝溶液與有效移除電解代謝物的原理，精巧的整合擷抗層析電泳法之電場與對流場，大大的簡化了管柱的組裝並使實驗能夠在穩定而方便的模式下操作。在實驗方面，我們以血紅素與ferritin之模型混合物，觀察擷抗層析電泳中動態平衡與蛋白質分離的現象；並以蛋白質等電點聚焦法，鑑定經不同的實驗操作條件所純化之血紅素溶液；結果顯示，擷抗層析電泳法具有相當優越的純化能力。我們相信，倘能進一步的改進實驗參數與突破此一原理本身的一些瓶頸，擷抗層析電泳法與J-Column將會對製備性蛋白質純化有重要而廣泛的應用。