Abstract
研究 horseradish peroxidase (HRP) 經 H2O2催化 p-cresol 氧化反應，以 HPLC 及質譜鑑定其產物，分別為4a,9b-dihydro-8,9b-di- methyl-3(4H)-dibenzofuranone（Pummerer’s ketone）、2,2′-dihydroxy-5, 5′-dimethylbiphenyl、2,2′,2′′-trihydroxyl-5,5′,5′′-trimethyl-m-terphenyl以及較大分子量的 oligomer，並發現各產物均可為 HRP 的受質。且根據 HPLC 分析反應過程中各產物分佈情形，提出 HRP / H2O2 催化 p-cresol 氧化反應的機制。 於 pH 5.0 的醋酸緩衝溶液中，因各產物與 p-cresol 競爭，造成HRP / H2O2 催化 p-cresol 反應逐漸被抑制的情況下，照 404 nm 的光，發現光可活化 HRP 而增加其催化 p-cresol 的反應速率。以 steady state 的方式求得 HRP / H2O2 催化 p-cresol、biphenyl 以及 Pummerer’s ketone 當作 p-cresol 催化反應中抑制劑時的動力學常數，分別為：p-cresol∼kcat：8.5 ×103 s-1，Km：14.0 mM；biphenyl∼kcat：1.9 ×102 s-1，Km：5.7 mM以及 Pummerer’s ketone：為競爭型抑制劑，其 KI：0.24 mM。而由動力學常數提出光活化 HRP 的機制。