Abstract
本文主要以逆流層析多段萃取設備配合以兩水相系統,分別做小分子,頭孢子素C的純化研究,以及大顆粒,動物細胞分離的探討。本文主要是以PEG╱硫酸銨兩水相系統,配合逆流層析的方法,從發酵濾液中分離純化頭孢子素C,並探討一些變因的影響。研究中發現,以兩水相之上層液為固定相會得到較好的分離效果。而在兩相中加入KSCN或丙酮亦會有幫助分離,其中,加入丙酮有非常良好的結果。此外,若在試料中加入與移動相一樣組成的硫酸銨,使其與移動相的組成相近,則即使處理較多試料時,仍能保持不錯的分離效果。此外,在細胞分離方面,本文主要是用PEG╱Dextran的兩水相系統來探討細胞在逆流層析儀中的分佈情形,其分離機制不同於一般常用的對流分佈(CCD)。研究結果發現,細胞若太早進入逆流層析系統中,則因管柱內兩相系統尚未穩定,因此沒有分離效果,反之,細胞如果太晚進入,則兩相已形成的連續界面會對細胞產生很強的吸附力,而使得細胞無法被移動相出,因此也沒有分離效果,其較理想的注入時段約為移動相進入後30分至一小時間。另外,若以梯度沖洗法,則會有較好的結果,不同細胞較能依其個別的表面性質而分佈。此外,本文也簡單探討本研究所用的偏心式管柱中,固定相與移動相的流動情形,及離心轉速對系統內固定相的保留及管柱效率的影響。