Abstract
本論文係分別使用一種新興的天然無毒交聯劑Genipin，以及一種創新的二元固定化技術，將Candida rugosa脂肪分解酵素固定於幾丁聚醣顆粒上。實驗中發現，當反應溫度為30℃及pH值為8的條件下，利用0.3%的Genipin為交聯劑去交聯幾丁聚醣擔體 6小時後，再把脂肪分解酵素固定在幾丁聚醣顆粒上，可得到蛋白質固定量達212.3□g /g-matrix及擁有水解活性11.7U/g-matrix的固定化酵素。值得一提的是，由於Genipin天然無毒的特性，因此利用它交聯而得的固定化酵素，具有相對於游離酵素高達109.1%的比活性。另一方面，當反應溫度為30℃及pH值為9的條件下，先以活化劑1-Ethyl-3-(3-dimethyl-aminopropyl)carbondiimide hydrochloride（EDC）為活化劑先將脂肪分解酵素固定在幾丁聚醣顆粒上，再以glutaraldehyde交聯劑將脂肪分解酵素進行第二次固定化的二元固定化技術，具有相對於單獨以交聯法或活化法製備的固定化酵素較高的水解活性（13.8U/g-matrix）及蛋白質固定量（343□g/g-matrix）。至於安定性方面，二元固定化法和以Genipin交聯而得的固定化酵素都擁有比游離酵素更佳的溫度安定性（40℃），而其pH安定範圍亦有增廣。另外，當使用批次反應多次重複進行水解反應後，兩者在分別重複回收使用10次及6次之後仍維持96.4%及78.2%以上之比活性。在分別以Arrhenius equation及Michalis-Menten方程式求出其活化能及Vmax及Kmax後可看出，相對於游離酵素，我們所研發出的兩種固定化酵素都具有較低的活化能和較高的Vmax及Kmax值。