Abstract
維生素的偵測在食品檢測上是一塊重要的領域，因為維生素是人體不可或缺的營養素之一，大部分必須藉由日常飲食中獲得。然而，在分析定量上卻缺乏了簡單、快速、低成本且操作簡單的感測技術。在此研究中，我們成功發展了一套新的偵測系統，免疫親和層析管柱 (immunoaffinity chromatographic column, IAC column)，針對水溶性維生素進行定量分析。論文第一部分以生物素為分析物，利用修飾有抗生物素抗體 (anti-biotin antibody)的免疫親和層析管柱為偵測平台，而表面修飾生物素、內包carboxyfluorescein染料的微脂球當作訊號放大劑。藉由微脂球與生物素競爭有限的抗體鍵結位置可以對生物素達到靈敏的偵測。若再藉由 35% 甲醇溶液的沖滌可以將抗體的傷害程度降至最低並且可有效地使抗體再生，使管柱可重複使用。此偵測系統對生物素的偵測極限為5.0 pg，線性範圍為10-12-10-4 M，分析一個樣品只需30分鐘。 論文第二部分則以另一種水溶性維生素葉酸為分析物。在此，我們自行合成一端修飾有葉酸的磷脂質，利用此磷脂質可以進一步合成出表面修飾葉酸、內包carboxyfluorescein染料的微脂球。利用免疫親和層析管柱可以對葉酸進行直接定量。靜相的修飾是將純化過後的抗葉酸抗體 (anti-folic acid antibody)以共價鍵的方式鍵結到羥基琥珀?亞胺活化的凝膠 (NHS-activated sepharose beads)上；而靜相因此對於葉酸具有強的親和力，接著將製備好的靜相填充到直徑1.9公分的聚丙烯管柱建架IAC系統。經此系統所得之校正曲線，其線性範圍為10-8到 10-4 M，偵測極限為6.9 ng，且同一支管柱可以重複使用高達50次，此外，為了證明免疫親和層析管柱可以應用於真實樣品分析，我們於本研究中檢測了三種市售維他命錠，發現偵測到的葉酸含量與標示值十分接近 (recovery rate 90-112%)。