Abstract
增生細胞核抗原(PCNA)是一種非組蛋白的核蛋白。PCNA表現在增生性細胞,在成熟動物肝組織中,PCNA mRNA量相當低。然而,肝細胞癌中PCNA基因表現卻大量增加; 並且癌組織中, PCNA基因的5'-CCGG-3'序列有低甲基化現象。本論文第一部份所探討問題是：抑制PCNA基因在肝組織表現的原因是什麼？由南方墨點分析結果顯示，老鼠肝再生過程中,PCNA的DNA甲基化狀態沒有明顯改變。老鼠PCNA基因啟動子只有一HpaⅡ位置,而此位置不論在正常或再生肝組織中都呈甲基化。為在人類細胞中證實此現象, 使用HepG2和Hep3B細胞來研究PCNA基因表現和DNA甲基化間的關係。 人類PCNA基因有16個HpaⅡ 位置,根據HpaⅡ及MspⅠ的限制 切割圖譜,活體內有許多HpaⅡ位置呈甲基化,當靜止細胞被血清刺激進入細胞週期,HpaⅡ和HhaⅠ的PCNA DNA甲基化狀態並無改變。在人類肝癌細胞中,使用5-azacytidine處理導致DNA 去甲基化後,PCNA基因的表現未受影響。用5-azacytidine處理人類原生纖維細胞, PCNA表現的生長調節性並未因此消失。PCNA基因呈無甲基化狀態的細胞株CHO.k1,其PCNA基因的表現依然具生長調節性。綜合以上的結論是：(1) DNA甲基化和PCNA基因表現的生長調節性並無相關。 (2)在肝細胞癌中,PCNA基因的DNA低甲基化現象並非細胞增生所致,可能是細胞癌化的結果。細胞被mitogen刺激進入細胞週期後,PCNA的表現主要集中在G1/S期。以離子化輻射處理細胞造成DNA 斷裂,此時正常的P53大量表現,導致細胞週期被阻止在G1/S期。將p53表現質體和老鼠PCNA啟動子同時轉移感染CHO.k1細胞,結果顯示老鼠的PCNA啟動子可以顯著地被正常P53抑制。相反地,P53突變種蛋白P53mut175H可以輕微提高老鼠PCNA啟動子活性。將接上條件性啟動子的P53表現質體轉移感染CHO.k1 使其穩定嵌入染色體,而後刺激啟動子驅動P53蛋白質表現,結果PCNA mRNA 表現和細胞的DNA合成以同步方式被抑制。