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參與訊息RNA 剪接體組合的成份分子
Thesis

參與訊息RNA 剪接體組合的成份分子

高宏穎
Masters, National Tsing Hua University
1989

Abstract

剪接體酵母菌RRR11蛋白質PRP19蛋白質硫35 (SPLICEOSOME)PRPSDS-PAGE
酵母菌 prp突變種是一種對溫度敏感的突變種,prp(precursor RNA processing) 表示核糖核酸前身的處理。這些 prp突變種在不許可的溫度下,他們細胞核內的訊息核糖核酸前身不能進行剪接的處理,因而造成訊息核糖核酸前身在核內有累積的現象。我們已經知道在剪接體(spliceosome) 組合的過程中,PRP11 和PRP19 的基因產物是不可或缺的。大多數經過熱處理後的prp 突變種淬取液可互補,但是prp11 和 prp19突變種的淬取液卻不能互補。我們設計了一個實驗方法,嚐試著去證明在有剪接活性的淬取液中,PRP11 和PRP19 的基因產物之間有交互作用並共存於一個有功能的複合體中。首先我們在試管中合成並用硫35標定 PRP19蛋白質,然後用這合成的PRP19 蛋白質去互補prp19 突變種的淬取物,以測試這合成蛋白質是否具有的功能。一旦這試管中合成的PRP19 蛋白質具有生物體內PRP19 蛋白質的活性時,我們用抗-PRP11 抗體去做免疫沈澱。倘若PRP11 和PRP19 基因產物之間有交互作用時,那麼抗- PRP11抗體會將硫35標定的PRP19 蛋白質一起沈澱下來。然而,實驗結果顯示,我們尚無法用現有的抗-PRP11 抗體將硫35標定的PRP19 蛋白質一起沈澱下來,同時,用抗-PRP19 抗體亦不能將硫35標定的 PRP11蛋白質沈澱下來。雖然如此,prp19 和prp11 突變種淬取液它們互補形式卻是一致的,這個觀察結果或許支持PRP19 和PRP11 一樣也存在一複合體的假設。從PRP19 的基因序列分析來看,我們預測它的基因產物為一個55kd的蛋白質分子。在硫酸十二酯鈉一聚丙烯醯受凝膠電泳(SDS-PAGE)中,我們發現這個PRP19 蛋白質有異常的移動性。影響PRP19 蛋白質不正常移動性的區域已被找出來,是位於PRP19 蛋白質的氨基末端。

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