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吳郭魚AMPA受器次單元GluR1的xT/Sxφ序列與蛋白質SAP97交互作用探討
Thesis

吳郭魚AMPA受器次單元GluR1的xT/Sxφ序列與蛋白質SAP97交互作用探討

林家豪
Masters, 國立清華大學, 生命科學系
2001

Abstract

AMPA受器 SAP97 麩胺酸受器 yeast two hybrid 交互作用
麩氨酸是脊椎動物中樞神經系統主要的興奮性神經衝動傳導物質之一。離子通道型麩氨酸受器依其藥理學及電生理學特性可分為AMPA、 kainate和NMDA受器等三大類。麩胺酸受器次單元的C端區域能與神經後突觸區域內的蛋白質產生交互作用,此作用可能與麩氨酸受器在神經後突觸細胞膜上的固定、聚集有關;或藉此把其他負責細胞內訊息傳遞的蛋白質募集至神經後突觸細胞區,並與麩氨酸受器發生結合,藉以調控麩氨酸受器離子通道的活性。前人研究中以免疫沈澱法及GST蛋白結合技術證明了老鼠GluR1的C端三個氨基酸序列TGL能與SAP97的第一個PDZ domain產生交互作用;而一些文獻中則推論SAP97的PDZ domain能與xS/Txφ(x為任何氨基酸,φ為疏水性氨基酸)序列的C端交互作用。比較老鼠的GluR1 C端序列,TGL,與吳郭魚的GluR1β C端序列,TGM,兩者皆為xS/Txφ,因此我們預測吳郭魚的GluR1β應該能與SAP97產生交互作用。在本實驗中,以吳郭魚GluR1β C端與SAP97第一個PDZ domain進行yeast two hybrid及GST蛋白結合實驗,探討兩者間是否能有交互作用,以及再驗證xS/Txφ型式的C端是否皆能與特定的PDZ domain產生交互作用,結果發現在yeast two hybrid實驗中,老鼠GluR1並未與SAP97有交互作用,在GST蛋白結合實驗中則能觀察到老鼠GluR1與SAP97的交互作用,並且也證明了吳郭魚GluR1β與SAP97的交互作用。由yeast two hybrid實驗結果可以知道yeast two hybrid可能無法偵測到一些蛋白質間交互作用,而在GST蛋白結合技術的實驗中則再一次證明SAP97的PDZ domain能與xS/Txφ序列的C端產生交互作用,而且吳郭魚GluR1β可能能與吳郭魚腦中類似SAP97的蛋白質進行交互作用,而使吳郭魚AMPA受器在突觸膜上的聚集及分佈受到調控。

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