Abstract
本論文所設計之實驗旨在研究哺乳類細胞在生理壓迫力之時和之後的細胞和生化回應，以及闡明造成此種回應的分子機制。在不同程度的熱處理，正常大白鼠腦細胞 (RBA-1)的細胞存活率高於大白鼠腦瘤細胞；一旦細胞以43℃處理 3小時，其間的差異為 30-50倍。在兩種細胞株，BSP70 和110 皆是可誘導HSPs，而 BSP72和90則在正常生長情況下為組成性表現且在受熱時可被加強合成。在加熱之時和之後在 RBA-1和9L細胞是不一樣的，此或許可以解釋兩種細胞株受勢處理後所得存活率之差異。苦 素甲 (withangulatin A)由抗癌中藥苦 所分離出來，是一種新確定的 (在生體外) 拓樸異構 Ⅱ之抑制劑。生體內，苦 素甲可造成細胞毒性，可抑制一般性蛋白質合成和誘導合成一組可由熱休克所產生的蛋白質。其中 70kDa蛋白質被確定即為熱休克蛋白質 70(HSP70)，因為：兩者在雙向聚丙醯膠體電泳上有相同位置，皆可被由人之 HSP70所得之單株抗體所認識，以及有相同的勝 圖譜。由苦 素甲所誘導之蛋白質合成在轉錄階層調控，因前處理 actinomycin D的細胞不能合成此些蛋白白質。而其誘發過程是不需新蛋白質合成的，因此種作用不受 cycloheximide的影響。另一受苦 素甲所影響的細胞效應是蛋白質磷酸化的改變，這包括一個 65kDa蛋白質磷酸化的增強 (此種作用也可在熱休克細胞中發生) 。更有甚者，此過程可在熱處理 7.5分鐘時即可看到，相信這早於HSPs合成。因此 65kDa蛋白質磷酸化的增強可能是熱休克和苦 素甲處理細胞的最早期的訊號之一，而這可能參與了細胞之熱休克回應的上游調控作用。由苦 素甲所誘導的現象中最明顯的是細胞的圓起 (rounding up)。此種形態改變伴隨著一些生化事件，包括vimentin電泳移動的延緩和磷酸化作用的增加。由雙向 32P標定之放射自動顯影圖，得出細胞處理50μM 苦 素甲 1和 3小時其vimentin磷酸化各增加 2.5和 1.8倍。基於以上分析，我們提議除了vimentin磷酸化作用外，尚有一未知之轉錄後修飾作用可能涉及了苦 素甲所造成的生化和形態上的改變。