Abstract
本研究是探討大白鼠肝麩胱甘 硫移轉 3-3(GST3-3，E.C.2.5.1.18)中三個半胱胺酸在酵 活性機制中所伴演的角色。我們利用分子生物技術得到完整的大白鼠GST3-3cDNA克隆。再利用杆狀病毒系統(Baculovirus Expression System) 及親和力管柱 (Affinity Column)分泌及純化具酵 活性的GST3-3蛋白質。此外，利用體外突變 (In vitro mutagenesis) 和杆狀病毒分泌系統，可得到不同的GST3-3蛋白質。例如：含二個半胱胺酸的蛋白質(C86S；C114S；和C173S)；含一個半胱胺酸的蛋白質(C86，114S；C86，173S；和C114，173S)；及不含半胱胺酸的蛋白質(CallS) 。同時，發現這些蛋白質仍然具備酵 活性。這些蛋白質分別在25℃及50℃進行化學修飾反應；并觀察修飾前後酵 活性的改變。在25℃反應，第86位置半胱胺酸容易被修飾。但是，不影響酵 活性。在50℃反應，第86及 114位置的半胱胺酸皆被化學修飾。且凡是具備第 114位置為半胱胺酸的蛋白質(GST3-3；C86S；C173S；和C86，173S)經過50℃修飾反應後，都喪失酵 活性。