Abstract
蛋白質的磷酸化與去磷酸化在維持中間絲蛋白結構的完整性中相當重要，利用許多可抑制1型及2A型蛋白質去磷酯酵素(分別簡稱PP1及PP2A) 的抑制劑來處理細胞均可造成中間絲蛋白重組。在本實驗中，我們利用岡田井酸-PP1及PP2A的抑制劑，試著區分9L 大白鼠腦瘤細胞中1型及2A型蛋白質去磷酯酵素對中間絲蛋白的角色。在9L大白鼠腦瘤細胞經由400 nM岡田井酸處理後，我們利用免疫沉澱取得磷酸化後的vimentin，再分別與1型及2A型蛋白質去磷酯酵素進行去磷酯化反應，結果顯示2A型蛋白質去磷酯酵素對vimentin有較高的活性，進一步分析細胞經岡田井酸處理後細胞內去磷酯酵素的活性，更顯示經由岡田井酸處理後2A型蛋白質去磷酯酵素的活性會被完全抑制，而1型蛋白質去磷酯酵素的活性只有少許減弱。接著，我們使用免疫螢光技術及共軛焦顯微鏡觀察細胞內蛋白質去磷酯酵素及vimentin的分布，找到細胞內2A型蛋白質去磷酯酵素與vimentin並存的證據，以及利用細胞分層分析可發現在岡田井酸處理後，細胞內2A型蛋白質去磷酯酵素伴隨vimentin轉移到可溶性部分，以及復原期回到不溶性部分。相對來說，1型蛋白質去磷酯酵素並沒有上述情形發生。這些現象也同時出現在使用低於十倍濃度的岡田井酸處理，更證實了PP2A，而非PP1，對維持細胞內vimentin完整性之重要。綜合來說，從以上結果可以說明2A型蛋白質去磷酯酵素是vimentin主要的去磷酯酵素，對於中間絲蛋白vimentin結構的完整具有決定性的影響。