Abstract
生物體受到高溫逆境時, 會引發所謂的熱休克反應,包括合成一般蛋白 質, DNA, 和RNA的能力降低, 細胞形態的改變, 同時細胞內會合成一系列 特殊的蛋白質, 稱為熱休克蛋白質。此外, 當細胞受熱後, 給予一段時間 恢復,細胞會產生暫時性抵抗高溫逆境的能力, 此現象被稱做 "耐熱性" 。曾有報告指出, 細胞受熱後,熱休克蛋白質會與細胞骨架組成分子作 用, 以保護並修復細胞骨架. 本篇報告即是探討細胞骨架的完整性是否與 耐熱性的發展有關。本實驗以9L大鼠腦瘤細胞為材料, 以withangulatin A(WA), cytochalasin D(CD), 及colchicine(CC) 三種藥物在加熱45℃, 15分鐘之前或之後, 分別加入細胞處理一小時, 以破壞細胞骨架成份 vimentin intermediate fi- lament, actin micro-filament, 以及 microtubule 的完整性。在恢復期間, 觀察細胞形態的變化差異, 並以存 活率測定耐熱性的程度有無差異。結果顯示, 無論是加熱前或加熱後, 以 CD及CC處理細胞, 其存活率和只加熱不加藥物處理的對照組無異,且同一 種藥物加熱前或後處理,形態上也無差異。受熱前以WA處理的細胞, 並不 能產生耐熱性, 而受熱後處理WA的細胞, 則可以產生耐熱性。此外, 利 用免疫螢光技術, 發現受熱前處理WA的細胞, vimentin會聚集在核周圍, 而受熱後的細胞, vimentin較不會受WA的破壞。再者, 利用界面活性劑萃 取法, 得知熱休克蛋白70 (HSC70)在受熱後較不易被萃取出來, 隨著恢復 時間增加,逐漸又回到可被萃取部份。受熱後處理WA的情況與受熱不加WA 處理類似, 而受熱前加WA的細胞,部份HSC70就一直停留在不可萃取部份, 而不回到可被萃取部份。由以上結果, 我們認為vimentin中間型絲蛋白 的完整性與耐熱性的發展有關, 並且HSC70可能藉由與vimentin結合,穩定 並保護 vimentin, 參與了這個過程。