Abstract
THKM76是一種具有抗微生物活性的天然物。我們之前證實在體外實驗中，THKM76會抑制人類結腸腺癌細胞株RKO細胞增生。在本論文中我們用THKM76處理數種人類癌細胞株，以研究其對癌細胞的作用。利用光學顯微鏡觀察THKM76處理過之皮膚癌細胞株C32和骨瘤細胞株MG-63，可以發現：THKM76會造成這些癌細胞萎縮變形、由substratum上剝離的現象。為了證實THKM76是否會引發程式細胞死亡，我們將急性T細胞白血病細胞株J45.01以acridine orange染色，接著以螢光顯微鏡觀察細胞核的型態。結果我們可觀察到部分細胞有細胞核濃縮和fragmentation的現象。接著利用流式細胞儀分析細胞可以看到sub-G1 peak。再以瓊膠電泳分析其DNA，發現以10 μg/ml THKM76處理 48小時的J45.01細胞有明顯的DNA fragmentation現象。上述現象顯示至少一部份THKM76所引發之癌細胞死亡是經由apoptosis的路徑。 以MTT assay的方法測試發現：THKM76對人類肝癌細胞株 HepG2/C3A、皮膚癌細胞株C32和骨瘤細胞株MG-63具有細胞毒性，且其作用與劑量和處理時間有關。為了研究自由基和粒腺體在THKM76引發細胞死亡過程中之角色，我們測試自由基和超氧化物清除劑對THKM76處理之C32細胞是否具有保護作用。我們發現以THKM76處理C32細胞時，若同時加入pyrrolidine dithiocarbamate、tryptophan、ruthenium red或allopurinol等化合物，並不能提高其存活率。然而，有部分經THKM76處理的J45.01細胞會減少對tetramethylrhodaminemethylester（一種對粒腺體膜電位敏感的螢光染劑）的吸收。這些結果暗示THKM76所造成的細胞死亡在我們的實驗條件下可能與自由基無關。