Abstract
肽基脯胺酸順反異構酶 (Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, PPIase) 普遍存在細胞質或細胞周質中，具有催化脯胺酸胜肽鍵順反異構物轉換的能力。幽門螺旋桿菌之PPIase，又名細胞結合因子 (CBF2)，其為一個毒素因子，會與胃黏膜上皮細胞的第四型類鐸受體 (Toll-like receptor 4) 結合並引發一連串訊息傳遞。幽門螺旋桿菌細胞結合因子 (HpCBF2) 是由299個胺基酸組成，N端 (胺基酸1-160) 為未知功能的功能區，C端 (胺基酸161-252) 為PPIase功能區。目前HpCBF2的立體結構未知。本實驗中，將HpCBF2成功表達並純化，分子量約為37 kDa。利用胜肽受質 (Suc-AAPF-pNA) 進行的耦合反應 (coupling assay)，測得HpCBF2對脯胺酸順反異構化的催化效率 (kcat/Km) 為238 ± 7.2 mM-1s-1。經由分析型超高速離心實驗測得HpCBF2以二聚體存在於溶液中。我們以PEG4000為主沉澱劑培養得到HpCBF2-a晶體，其X光繞射的解析度為2.55 Å，此晶體的空間群 (space group) 為C2，晶格參數為a = 108.1 Å, b = 54.1 Å, c = 123.3 Å, β = 94.3°，不對稱單元中具有兩個分子。我們嘗試利用HpCBF2的同源蛋白進行分子置換法 (molecular replacement) 計算HpCBF2結構相位角，但是失敗。因此我們進行硒化甲硫胺酸衍生蛋白 (Se-HpCBF2) 的製備，我們成功得到Se-HpCBF2蛋白，並在類似於HpCBF2-a晶體的長晶條件下得到Se-HpCBF2-b晶體，其X光繞射的解析度為3.4 Å，此晶體的空間群為C2，晶格參數為a = 265.9 Å, b = 53.9 Å, c = 105.2 Å, β = 109.9°，不對稱單元中具有四個分子。未來希望藉由硒重金屬衍生蛋白利用多波長異常散射法 (multiwavelength anomalous dispersion) 決定HpCBF2的相位角，求得完整的立體結構，了解HpCBF2受質結合位置，進而得知HpCBF2各個功能區的生物功能與其作用機制。