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後突觸質密區結構之研究─蛋白質間雙硫鍵的形成與影響
Thesis

後突觸質密區結構之研究─蛋白質間雙硫鍵的形成與影響

賴森林
Masters, National Tsing Hua University
1997

Abstract

後突觸雙硫鍵後突觸質密區蔗糖濃度梯度離心對角線電泳醋酸碘 postsynapsedisulfide bondpostsynaptic densitysucrose density gradient ultracentrifugationdiagonal gel electrophoresisiodoacetic acid
摘要後突觸質密區(postsynaptic density, 簡稱PSD)是後突觸膜(postsynaptic membrane)下方由約30種蛋白質聚集而成的緊密結構。根據PSD的蛋白質組成與所在位置,可以推測PSD與神經傳導及神經可塑性有相當密切的關係。本實驗室過去將PSD以蔗糖濃度梯度離心後,發現有一群以雙硫鍵結合的雙硫鍵結蛋白聚合體(disulfid-bond cross-linkedaggregate),會出現在蔗糖濃度39%的地方;但是細胞內其他次級組織(如mitochondria、microsome)中,則沒有發現類似的結構。為了了解雙硫鍵結蛋白聚合體產生的原因,我們在純化PSD的過程中加入iodoacetic acid(IAA)以防止雙硫鍵在純化過程中產生。在比較PSD與純化過程加入IAA的PSD(Carboxyl-methylated PSD; CM-PSD)的生化及物理性質後,我們得到以下結論:一、PSD是由一基本結構重疊;二、基本結構內的部分蛋白質以雙硫鍵結合,而且雙硫鍵深埋在PSD結構中;三、純化過程的非還原環境導致基本結構間形成雙硫鍵,增加純化出的PSD中雙硫鍵結合的蛋白質聚合體的含量;四、與含有大量雙硫鍵的PSD比較,CM-PSD的結構顯得非常鬆散,更近於預期中腦內PSD的物理特性。

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