Abstract
抗心脂質抗体 (anticardiolipin antibody ; ACLA) 在臨床上根據統計分析和血栓有密切的關聯,但機制並不清楚。為了瞭解抗體 ACLA 引發血栓的機制,我們利用兔子進行免疫產生抗體,經過純化後以純化的ACLA抗體對膠濾型血小板細胞的活化反應機制進行探討,包括凝集反應,抑制劑種類,對各種磷脂質及血小板細胞膜上蛋白質鍵結合性,訊息傳遞以及抗體和三種血小板刺激劑thrombin, collagen epinephrine 間的協同作用。抗體 ACLA 可以活化血小板引起凝集反應, 以酵素免疫分析法 (Enzymelinked immunoassay ; ELISA) 測定抗體對直接 coating在 well 上的各種磷脂質, 其中 syphingomyeline (SM) 及 phos-phatidylethanolamine(PE) 有很強的鍵結力 (binding activity),但在liposomesuspension的狀態 SM, PE 及 PE/PC (1:1) 則其鍵結力很低,以流動式細胞螢光免疫法 (flow cytoflurometeric immuno assay) 及ELISA 二種方式顯示抗體ACLA 可以直接鍵結到血小板上,而由西方墨點法更可看到細胞膜上80 kDa蛋白質和抗體有專一性的鍵結。由掃描式電子顯微鏡的觀察 7 μg/ml的抗體便足以造成血小板的變形。各種抑制劑EDTA, aspirin, PGE1, anti-mycin A 及2 -deoxyglucose以及抗體的F(ab')2 fragment 皆可以抑制抗體引起的凝集反應,但抗Fc 受體的單株抗體 MoAb FcR2 則不會抑制凝集。在生化反應及訊息傳遞方面抗體ACLA 可以 (1) 抑制 cAMP 的產生 (2)增加細胞內鈣離子濃度及降低 pH值 (3) 增加 thromboxane A2的產生 (4) 活化 PI (phosphoinositol)cycle 的代謝 (5) 造成 47kDa及20 kDa蛋白磷酸化 (6) 引起三種顆粒體的釋出作用,尤其是對α-granule, 因此在抗體 ACLA 所引起凝集反應的機制上可能包括Na+/H+ exchanger 的活化, 並牽涉到 G-protein 的參與,抗體藉其F(ab')2-fragment 和 80 kDa 受體鍵結以活化血小板, 產生各種訊息傳遞包括 protein kinase C (PKC), myosine light chainkinase (MLCK) 的活化等及顆粒體的釋出作用。