Abstract
僋C脂質抗體的出現會引發血栓、續發性流產及血小板減少等病症。本 文 探討低濃度之血小板刺激劑 thrombin 與抗磷脂質抗體共同作用 活化血 小板之機制。以 cardiolipin (CL)- 及 phospha-tidylserinePS)- liposome 分別免疫紐西蘭大白兔，並以 CL- 及 PS-liposome嬪O純化之 anti-CL antibodies (ACLA)，anti-PS antibodiesAPSA) 可以活化血小 板引起凝集反應，因為此方法需經 仿萃取分鰳袙銵A且同時在樣品中含 大量其他蛋白質，故嘗試以不同方式純化。) 以 protein-A sepharose column 純化所得之 IgG-ACLA 及 -APSA 則ㄗ蒗﹞あ憭p板之活性，回收 率約 20％ (以 Gly-Tyr 洗出)；2) 此外H蔗糖濃度梯度超高速離心替代 以 仿分離 liposome 與蛋白質的方法鵀閉〝吨壯凗擐^收率而言很低， 僅為 仿純化所得之 5％，故仍延峟麈瞻々隤k。C濃度抗體 (7μg/ml) 和低濃度 thrombin (0.01U/ml) 對活化血小板釣韟P作用的效果 (約為加 成之 2 倍)，包括引起明顯凝集反應，增加α- 及 dense granule 的釋 出作用，對於 47 及 20 kDa 蛋白質的磷臚ぁ蝳酗j於加成的結果 (約為 1.4 倍)，細胞內鈣離子增加則為加成狨部CIndomethacin、genistein 及 methyl 2,5-dihydroxy-cinnamateMDHC) 對抗體與 thrombin (0.01U/ ml) 共同作用所引發之凝集有明顯漣磻謏@用。以掃描式電子顯微鏡 (SEM) 觀察血小板受活化後形態之變ヾA可觀察到原低濃度抗體及 thrombin 僅引發形變，受 thrombin峓凗擐@同作用後有明顯的血小板凝 集反應。以西方免疫墨點法分析刺E劑與抗體引發之血小板蛋白質 tyrosine phosphorylation，結果顯示b未經任何處理之血小板內有 tyrosine phosphorylation 存在之蛋白镼]括 125、64/63、60、55 及 53 kDa，以 thrombin 或抗體單獨處理憭p板時，除60 kDa 之外，其餘上 述蛋白質之 tyrosine phosphoryation 均有增加，125 kDa 增強 15-20 倍，64/63、55 及 53 kDa 增強.5-3 倍。