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抗輻射奇異球菌的Deinococcus radiodurans多變劑抗性之遺傳研究
Thesis

抗輻射奇異球菌的Deinococcus radiodurans多變劑抗性之遺傳研究

邱明仁
Masters, National Tsing Hua University
1990

Abstract

抗輻射奇異球菌多突變劑短波紫外線酵素分析回復株基因 (FUV)
Deinococcus radiodurans 是Deinococcaceae菌中對DNA 傷害之抗性特性研究最多的菌種。一株由D.radiodurans IR分離出來的短波紫外線(FUV) 敏感突變株S101被發現同時對加瑪射線(γ-ry) ,絲裂黴素(mitomycin C;MTC) 和N-methyl-N'-nitor-N-n-itrosoguanidine(MNNG) 這些突變劑敏感,並且也失去了野生株IR擁有的FUV 引發FUV 抗性(FUV-induced FUV rosistance;FUV-IFUVR)。S101的這些表現形的缺失,都可以經由自動突變的發生而得以回復。這結果暗示了在D.radiodurans IR中存在著一段與多變劑抗性(multiple-mudiodurans resistance;MMR) 和FUV-IFUVR 相關連的基因,並且其產物可能為一調控蛋白。一段含有D.radiodurans IR 436 bp 的SauA DNA片段在這實驗中被分離出來,由含有抗chloramphenicol(cm )Escherichia coli質體pBR328所攜帶( 叫pT140),當送入S101之後,可得到MTC 轉形株。這些MTC 形株都完整地回復了多突變劑抗性(MMR) 和FUV-IFUVR ,但是其轉形頻率相當低( 約1.5×10 /cell)。經過限制酵素分析,發現pT149 上的pB328 部份發生了一個突變,將這突變修正之後的pT149 ( 叫pCL13)送入S101也可以相同的頻率得到MTC 轉形株。當將環狀的pCL13 送入S101後所得到的Cm MTC轉形株再經分子內重組可以10 至10 的頻率得到MTC Cm 之回復株,這些頻率比自動突變頻率(MTC ←MTC )高出百倍以上。依據上述實驗結果,我們推測該436 bp的DNA 片段包含著調控MMR 和FUV-IFUVR 之基因的一部份。

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