Abstract
脯胺酸引導的蛋白質激脢 (proline-directed protein kinases,PDPKs)是一族以其受質氨基酸序列特異性命名的酵素群. 過去的研究發現此酵素群在調控細胞反應外界物理, 化學及藥物刺激, 細胞分裂過程, 甚至於癌細胞發生的訊號傳遞過程中, 扮演了非常重要的角色. 研究發現脯胺酸引導的蛋白質激脢成員之一 -PDPK FA/GSK-3a 在人類癌細胞中有過度表現的現象, 並且在臨床上的研究證明, 在不同時期的甲狀腺癌, 子宮頸癌及肝癌組織中, 此酵素會隨著癌細胞分化惡化的程度而有顯著過度表現的現象. 此一研究結果暗示 PDPK FA/GSK-3a 可能在調控細胞增殖, 分化以及癌細胞發生的過程中, 扮演了重要的角色. 在本論文中, 我們由正常人類成纖細胞中選殖了PDPK FA/GSK-3a, 經由 DNA 序列分析得知此片段比 He et al. (Nature 374:617, 1995) 發表的序列較短, 缺失了部份5'端的序列. 利用此較短的 DNA 片段, 我們構築了一個反義 RNA 的表現載體. 將此反義 RNA 的表現載體轉殖至人類A431 及 HeLa癌細胞中表現, 結果發現其可抑制細胞中 PDPK FA/GSK-3a 的表現, 但並不影響其他相似度很高的蛋白質激脢之表現量. 由此結果得知, 此構築的反義 RNA表現載體可專一的抑制癌細胞中 PDPK FA/GSK-3a 的表現. 應用此反義RNA 的技術將可幫助我們進一步研究 PDPK FA/GSK-3a 在細胞中的功能,及其在細胞中調控與被調控之分子機制.