Abstract
利用細菌, 酵母菌, 昆蟲細胞, 哺乳動細胞, 甚至植物細胞, 來表現異質蛋白, 有賴特殊載體及訊息序列的調控; 而酵母菌因有結合原核生物的生長特性及分子遺傳的操作的優勢外, 更有真核生物轉譯後修飾(posttranslational modifi -cation)作用; 在利用特殊的載體將外來基因訊息傳遞到宿主的基因組中, 確定所要表現的蛋白及希望蛋白表現的位置。本實驗所採用的酵母菌表現系統(Pichia expression system), 除了有上述的優點外, 藉由特殊因子的帶領更可將表現的蛋白分泌至培養基中, 使純化的工作更為簡便。本實驗以水稻台農六十七號根部 cDNA 基因庫所篩選的類金屬硫蛋白基因(OsMT I)密碼區重組至 pPIC9 外泌表現載體中, 藉由 spheroplast 轉殖的方法, 經過不同線型化的處理,將表現載體轉殖嵌入 Methylotrophic 酵母菌 Pichia pastoris GS115 hisstrain 基因組中, 藉著震盪瓶的培養與高細胞密度發酵的養殖方式, 把甲醇誘導啟動子(methanol inducible promoter)啟動, 以細胞外泌方式表現, 純化此蛋白, 並分別利用原子火燄吸光光譜儀進行蛋白對鋅離子結合的分析, 其最終目的是想得到大量的蛋白, 以對植物金屬硫蛋白結構與功能有更透徹的了解。