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海洋矽藻(NITZSCHIA-ALBA)的蘋果酸脫氫□的純化及分子性質分析
Thesis

海洋矽藻(NITZSCHIA-ALBA)的蘋果酸脫氫□的純化及分子性質分析

岳嶽
Masters, National Tsing Hua University
1987

Abstract

海洋矽藻蘋果酸脫氫均一性酵素四合體雙合體沈降係數次體分子量 NITZSCHIA-ALBAL-MALATE-NAD-OXIDOREDUETASEHOMOGENEITYTETRAMERDIMERSEDMENTATION-COEFFICIENTSUBUNIT-MOLECULAR-WEIGHT
海洋矽藻(Nitzschia alba)的蘋果酸脫氫 (L-malate:NAD oxidoreduetase ,EC1.1.1.37)經過離子交換管柱、分子篩、親和性管柱等純化步驟達到所謂均一性(homogeneity )其最後產率為58%,純化度增為原來685倍。此酵素經過分子篩計算得知其分子量為322.000,另外從沈降係數(sedmentation coef-ficient )測得其分子量約為316,000;關於其次體分子量(subunit molec-ular weight ),乃透過十二烷硫酸鈉之聚丙烯醯胺膠體電泳(SDS-PAGE)分析知其只含有一種次體,而分子量經過標準蛋白質計算為38500,從其自然狀態(nat-ive )及次體分子量來看,這些結果指出此酵素可能由8個相同的次體組合而成。到目前為止,已發表的蘋果酸脫氫 除了兩種四合體(tetramer)外,其餘皆為雙合體(dimer)結構,對海洋矽藻酵素來看,它是目前發現最巨大的一種蘋果酸脫氫□。至於此酵素的N 端胺基酸分析,發現其序列為Arg-Lys-Val-Ala-Val-Met-Gly-Ala-Ala-Gly-Gly-Ile-Gly-Gln-Pro-Leu-Ser... ...此種序列與豬心、大腸桿菌、酵母菌及西瓜子葉所發表的序列有相當高的相似性,此種相似性的區域經前人以x-ray 繞射實驗發現其三度空間結構與酵表生理活性有關。此外我們亦對此酵素的基本物理化學性質的結果有一分析討論。

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