Abstract
液泡囊(tonoplast)包含有一種具有質子轉移與水解腺核酸甘三磷酸活性 的酵素稱為腺核甘酸水解酵素.液泡囊腺核甘水解酵素是利用白化綠豆下 胚軸作為材料,經由兩個步驟的清潔劑處理而得.並且它的cDNA序列已經被 選殖出來了.為了要去找出腺核甘水解酵素的活性位置以及它的作用機制. 我們試著去找出液泡囊腺核甘水解酵素上腺核甘三磷酸結合區上的氨基酸 序列組成.腺核甘酸水解酵素經由FITC與IAEDANS 標定之後,它的酵素活性 可以被不可逆的抑制.經由電泳膠片(SDS-PAGE) 分析後發現,不管是FITC 或是IAEDANS都能很專一性的標定在液泡囊腺核甘水解酵素上的A次體上. 經由動力學的研究發現,FITC或 IAEDANS抑制液泡囊腺核甘酸酵素是以每 mole腺核甘酸酵素,標定一mole的FITC或一mole的IAEDANS.當腺核甘酸存 在之下加入鎂離子,FITC或IAEDANS 對腺核甘酸酵素的抑制作用可以被保 護.因此FITC或 IAEDANS可能是標定在腺核甘酸水解酵素的性區上.由腺核 甘酸水解酵素經由FITC或IAEDANS標定在其A次體之後,再經由trypsin 分 解並以 HPLC分析.得到純化的FITC與IAEDANS 所標定的 peptide之後, 經由氨基酸序列分析發現, 由 FITC 標定得到的 peptide在440與441為兩 個賴氨酸,是可能的FITC標定區.而另一段由IAEDANS所標定的peptide 則 接近於腺核甘酸水解酵A次體上靠N端的區域.