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牛蛙卵細胞之核醣 酸水解酵素剞其抑制蛋白的純化及特性研究
Thesis

牛蛙卵細胞之核醣 酸水解酵素剞其抑制蛋白的純化及特性研究

蔡宜修
Masters, National Tsing Hua University
1990

Abstract

牛蛙卵細胞核醣核酸水解酵素游離超高速離心膠質蛋白電泳道爾吞 PHOSPHOCELLULOSE
在牛蛙的卵細胞中,存在著一種核醣核酸水解酵素。其以兩種不同的形態出現:第一種形太為游離形態;具有分解核醣核酸的活性。第二種形態為潛伏性的形態;此一形態是由於核醣核酸水解酵素與其抑制蛋白形成--複合物,因此不具有爭解核醣核酸的活性。游離形態的核醣核酸水解酵素可吸附在phosphocellulose管柱層析中,而潛伏形態的核醣核酸水解酵素則無法吸附,此潛伏形態的核醣核酸水解酵素經由加熱至 60℃ 或加入1mM 的對一羥基苯甲酸汞之後,可恢復其分解核醣核酸的能力。牛蛙的卵細胞由1500,000g 力的超高速離心,再經由phosphocellulose,Sephadex G 75, heparin Sepharose CL-6B,以及 DEAE-cellulose 的管柱層析,可純化出游離形態的核醣核酸水解酵素,其分子量的大小,經由15% 的膠質蛋白電泳可知為10,000道爾吞,其對於核醣核酸中的嘧啶-鳥糞嘌呤序列有專一性。但是,其活性在加熱至 80℃ ,15分鐘即被抑制。此核醣核酸水解酵素用來免疫兔子後得到之抗血清可以抑制其活性,同時經由免疫沈澱法,此核醣核酸水解酵素可被抗血清沈澱下來。在牛蛙卵細胞中,核醣核酸水解酵素的抑制蛋白均與此酵素形成複合物,即不具游離形態,此抑制蛋白經由 phosphocellulose ,汞以及抗核醣核酸水解酵素之Ig G之管柱層析之後純化出來,其分子量經由 6% 膠質蛋白電泳可知為110,000 道爾吞。此抑制蛋白之活性可經由加熱至60℃, 15 分鐘或者用1mM 對-羥基本甲酸汞處理,而受到抑制。

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