Abstract
目前，昆蟲桿狀病毒（Baculovirus）已被證實可感染哺乳動物細胞，為優秀的基因載體，可應用於體內及體外的基因治療。根據桿狀病毒對昆蟲細胞之感染能力所測定出的病毒力價和multiplicity of infection（MOI），一直被當作定量桿狀病毒劑量的依據，然而病毒力價和MOI卻不能準確地反映病毒的轉導能力。因此我們運用金屬硫蛋白啟動子(metallothionein promoter)來建立一套具彈性測定病毒轉導能力的分析方法；當定量病毒之轉導能力時，加入誘導物(ZnSO4)，驅動EGFP基因的表現；反之，若病毒運用於基因治療載體時，則不加誘導物，關閉報導基因。本研究中，我們首先建構了重組桿狀病毒Bac-ME，找出200 □M ZnSO4誘導24小時作為最佳誘導條件，其總螢光強度約為未誘導表現之750倍，接著利用滴定曲線，證明系統對於不同批次病毒的轉導能力具有辨識度，隨後針對該病毒的轉導效價來轉導相同病毒劑量(MOT)，觀察對應的轉導效率，顯示系統定量效價精確度高，能代表不同批次病毒的轉導能力。我們進一步利用四種不同的病毒劑量(MOT)去轉導HEK293、Chondrocyte、MSC236細胞，觀察各自轉導效率的表現，證明以HeLa細胞所制定出的轉導效價值，可以精確地反映在其他不同哺乳動物細胞中的轉導效率，且系統亦能應用於其他細胞株上。另外，為在基因治療實驗運用，我們將重組桿狀病毒Bac-MECB (增加CMV啟動子驅動BMP-2表現的基因片段)，在沒有誘導的情況，使用不同病毒劑量轉導兔子的軟骨細胞，並以ELISA分析隨著不同轉導劑量，在軟骨細胞內所對應的生長因子(BMP-2)表現情形。結果顯示BMP-2濃度隨著病毒劑量增加而上升，醣胺素染色結果也顯示BMP-2的確發揮刺激細胞外間質生成之效用，且BMP-2表現量和轉導劑量(MOT)兩者之間有正比例關係。因此我們的確可以運用此分析方法，評估桿狀病毒作為基因治療載體的使用劑量，和預測目標基因的傳遞效率，這對於基因治療研究是一大助益!