Abstract
中文摘要: 以白化綠豆芽為初始材料﹐利用Ficoll梯度及二聚合體相層分隔法(two- polymer phase partition)可分得高含量的內質網液泡(ER-enriched vesicles)。此內質網膜雖含有液 泡焦磷酸水解酵素(vacuolar H+- PPase),但藉由清潔劑(Triton X-100)的滲透作用﹐此 多胜類應是液泡 焦磷酸水解酵素的新生轉譯產物(translational product)。另外﹐利 用抗焦磷酸水解酵素的抗體亦無法將內質網上質子移位(proton- translocation)的反應 抑制﹐由此結果更排除了液泡污染的可能性。在 特性方面﹐不管在焦磷酸水解及質子移 位的反應活性上﹐鎂離子與焦磷 酸的比例在60比1最好。在質子移位的反應中﹐鉀離子是 不可或缺的。此 外它可被一般焦磷酸水解酵素的抑制劑﹐如氟離子所抑制。同時﹐將內 質網與液泡囊膜上的焦磷酸水解酵素在特性上逐一作比較﹐如輔因子與受 質的比例 (cofactor/substrate ratio)﹐酸鹼值﹐清潔劑､受質類 似物﹐氟化鉀及不同化學修飾 物等。上述結果指出內質網存在著一新種 的焦磷酸水解酵素,而與高等植物液泡囊膜 (tonolast)上的酵素不同 。進一步研究此內質網上的焦磷酸水解酵素﹐吾人依序使用去 氧膽鹽( deoxycholic acid)及離磷脂醯膽鹼(lysophosphatidylcholne)將焦磷酸 水解酵 素由膜上挖出。溶出的酵素再以分子篩(Sephacryl S-200)及兩 次陰離子交換層析 (Mono-Q anion exchanger)純化之。由電泳分 析知道﹐純化的酵素為單一74仟道爾頓的 多胜類。而由分子篩層析實驗 得知此純化的內質網焦磷酸水解酵素其分子大小為170仟 道爾頓。再者 ﹐由輻射鈍化法獲得未純化及純化的內質網焦磷酸水解酵素﹐在執行焦磷 酸水解反應時其功能大小(functional masses)分別為178.6±9.2及143.4 ±4.7仟道爾頓。在內質網液泡上存在著一嶄新的焦磷酸水解酵素﹐與高 等植物中的液泡囊膜焦磷酸水解 酵素有所不同﹐而上述酵素在功能執行 上應是以雙體(dimer)的型態進行著。