Abstract
為了進一步了解磷脂□及腱前磷脂□神經毒其酵素活性和毒性部位的構造特質及相關性，本論文使用由Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ及Ｎａｊａ ｎｉｇｒｉｃｏｌｌｉｓ蛇毒純化的磷脂□，及兩種腱前磷脂□神經毒Ｎｏｔｅｘｉｎ及β1-Ｂｕｎｇ－ａｒｏｔｏｘｉｎ（β1-Ｂｇｔ，由Ａ鏈及Ｂ鏈組成的雙鍵多胜□）進行氮端區域及離胺酸之化學修飾。我們使用Ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ ｓｕｌｆｏｎａｔｅ（ＴＮＢＳ）特異性的對磷脂□及腱前磷脂□神經毒之氮端α－胺基修飾，並以高壓液相層析法將修飾衍生物進一步純化。氮端α－胺基被修飾後的衍生物，酵素活性及致死毒性同時受到破壞。以ＣＮＢｒ將磷脂□及β1-Ｂｇｔ之Ａ鍵胺基酸次序第六及八位置的甲硫胺酸，其酵素活性或致死毒性亦急遽下降。這些結果顯示磷脂□及腱前磷脂□神經毒的氮端區域和其生物活性密切相關。以ＴＮＢＳ對Ｎ•ｎａｊａ ａｔｒａ磷脂□進行離胺酸之化學修飾後，使用高壓液相層析法分離得到兩種主要的Ｔｒｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌａｔｅｄ（ＴＮＰ）修飾衍生物，ＴＮＰ－１及ＴＮＰ－２。ＴＮＰ－１中僅Ｌｙｓ－６受到修飾，而ＴＮＰ－２中Ｌｙｓ－６及Ｌｙｓ－７１同時受到修飾。進一步檢測其生物活性，顯示Ｌｙｓ－６在磷脂□之酵素活性功能上極其重要，而Ｌｙｓ－７１與其致死毒性相關。先前的研究證實修飾Ｔｙｒ－６９導致磷脂□之致死毒性急劇下降，綜合本實騛及此一結果推論Ｔｙｒ－６９及Ｌｙｓ－７１之鄰近區域和磷脂□的毒性功能有關。氮端區域及離胺酸被修飾後的衍生物仍然保有Ｃａ2+的結合能力，顯然氮端區域及離胺酸並未真接參與酵素活性之機制。而螢光測定則顯示磷脂□及β1-Ｂｇｔ之Ａ鍵的氮端區域對於維持其酵素活性中心的結構特性相當重要。胰臟磷脂□及Ｃｒｏｔａｌｕｓ ａｔｒｏｘ蛇毒磷脂□的立體結構顯示氮端區域 以氫鍵和酵素活性中心連接形成Ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄｉｎｇ ｎｅｔｗｏｒｋ，此一Ｈｙｄｒｏｇｅｎｂｏｎｄｉｎｇ ｎｅｔｗｏｒｋ並可穩定Ｔｙｒ－７３所在胜□片段之結構。其他研究報告亦顯示腱前磷脂□神經毒的氮端區域可增強胺基酸次序５８－７６之Ｔ－ｗｘｉｃｉｔｙ ｄｏｍａｉｎ的毒性作用。綜合上述及本實驗結果，顯示磷脂□及腱前磷脂□神經毒的氮端區域在維持其酵素活性及毒性部位的功能結構上扮演重要的角色。