Abstract
本論文分為兩部分。第一部分探討神經細胞內GFP-ZnT1-4表現與鋅離子貯存位置關連性。鋅離子在神經細胞內具有重要的生理功能，但是當細胞內鋅離子濃度太高時反而會成為毒害。細胞內鋅離子濃度主要經由兩種途徑維持：一為metallothionine與過量的鋅離子結合；二為藉由zinc transpertor將過量的鋅離子送出細胞或是隔離到胞器內。在中樞神經系統內，大多數對Zinc transporter功能及表現的研究是於腦組織中進行，然後推論在神經細胞中有Zinc transporter出現，且其功能和特性與在其他種類細胞或是eukaryotic organism當中相似。我們將GFP-ZnT1-4經由transfection送入神經細胞中，配合鋅離子染色或免疫螢光染色標定不同的胞器，希望瞭解神經細胞內ZnT1-4和鋅離子貯存位置的關連性。我們得到在不同胞器中， GFP-ZnT1與胞器重疊的比例：Lysosome (17.7±7.9%) > Mitochondria (15.8±6.7%) > Early endosome (12.3±5.0%) > ER (10.6±3.5%) > TGN (5.9±3.0%)；GFP-ZnT2與胞器重疊的比例：Lysosome (90.2±6.2%) > TGN (49.4±27.6%) > Mitochondria (47.5±6.8%) > Early endosome (36.4±8.1%) > ER (14.8±4.5%)；GFP-ZnT3與胞器重疊的比例：TGN (76.1±6.4%) > Lysosome (57.9±9.6%) > Mitochondria (50.6±0.7%) > Early endosome (25.8±4.7%) > ER (8.3±4.8%)；GFP-ZnT4與胞器重疊的比例：Lysosome (58.0±9.0%) > Mitochondria (23.2±4.3%) > Early endosome (21.8±8.1%) > TGN (19.9±7.0%) > ER (15.5±3.1%)。由此得到兩點推論：(1) ZnT1在神經細胞內主要分佈於細胞膜上；(2) ZnT2,-3可能位於mitochodria。 第二部分為尋找適當條件以觀察活細胞內樹突小刺中的microtubule。樹突小刺為神經元之樹突上的小刺狀突起，是興奮性突觸生成之所在。樹突小刺中是否有microtubule存在，仍有很大的爭議。基於本實驗室過去對樹突小刺的研究，認為有microtubule存在於樹突小刺中。但由文獻中得知，microtubule為一高度動態的結構，容易在實驗過程中瓦解而觀察不到。我們將有螢光的□-tubulin 經由transfection送到神經細胞中，期望找到合適的條件，能在活細胞當中以螢光觀察到樹突小刺內的microtubule。初步發現，將觀察的溫度控制在36-37℃時，能在少數活細胞的樹突小刺內觀察到microtubule。