Abstract
胃幽門螺旋菌(Helicobacter pylori)為微需氧的革蘭氏陰性菌，可抵擋胃酸的環境，其感染會導致慢性胃炎，並可能演變成胃潰瘍(gastric ulcer)、十二指腸潰瘍(duodenal ulcer)及胃癌(gastric cancer)。在先前的研究指出，膽固醇對於胃幽門螺旋菌的存活扮演著相當重要的角色，HP0421基因所合成的膽固醇糖化轉移酵素(cholesterol-α-glucosyltransferase, αCGase)，可以從宿主表皮細胞所吸收的膽固醇加上葡萄糖，在細菌細胞壁脂質層上形成cholesterol glucosides，然後呈現在胃幽門螺旋菌的細胞膜上，重要是它可避免巨噬細胞的吞噬作用、T細胞的活化及細菌的生長，這個反應動作在胃幽門螺旋菌去躲避人體的免疫反應有相當大的關聯性。胃幽門螺旋菌在感染細胞時較傾向結合於富含膽固醇之脂筏(lipid rafts)，透過脂筏的形成而結合上胃表皮細胞，通常在脂筏上富含膽固醇和磷脂質。研究發現缺乏αCGase酵素的胃幽門螺旋菌之菌株在胃部不易形成脂筏，而較難感染胃部的細胞，這表示脂筏對於胃幽門螺旋菌在感染機制上扮演著重要的角色。本研究想探討在人工脂質膜上，αCG的存在是否會影響到脂質膜的流動性。我們利用重組蛋白質αCGase與螢光標記的膽固醇去合成含有螢光的αCG。藉由含有膽固醇的微脂體，我們發現膽固醇可以促使相位分離(phase separation)導致形成Lo與Ld區域。共軛聚焦顯微鏡觀察含有螢光αCG的微脂體發現，在Lo區域比Ld區域含有更多的螢光αCG之分佈。螢光相關光譜分析發現DiIC18的擴散係數(diffusion coefficient)是沒有差異性的。為了更深入探討αCGase酵素活性，我們純化出不同缺失片段的αCGase蛋白質，發現均沒有酵素活性反應。猜測完整的胺基酸序列對於αCGase酵素反應功能上是相對重要的。而螢光αCG大部分均分佈在Lo區域，在這區域可能影響脂質膜的流動性。