Abstract
本實驗室過去的研究發現，嗜中性白血球對於中東非眼鏡蛇之心臟毒素Toxin γ (Tγ)具有很強的耐受性，但是在短時間內受到Tγ的刺激下，嗜中性白血球的肌動蛋白會聚集成聚合體，造成嗜中性白血球的形變；前述Tγ對嗜中性白血球所造成之影響，並非一種趨化性作用 (從趨化盤的實驗證明Tγ不會引起嗜中性白血球形變而穿透分隔膜)，顯然地，Tγ是以不同於fMLP(化學趨化物)之路徑，來引發細胞的肌動蛋白產生聚集化。為探討Tγ在嗜中性白血球膜上的作用機制，我們用介面活性劑(detergent)將細胞膜加以切割後，以蔗糖梯度(sucrose gradient)加以區分為九個部分(DRM extraction)，並用免疫染色法鑑定每個部分的特定蛋白含量，再以薄膜層析碘染法鑑定每個部分的脂質成分；結果發現Tγ在細胞膜上所分佈的位置和磷化脂質(sulfatide)的位置相似，位於脂筏區域(raft)，且分布在蔗糖梯度分離部分的前端，而受到刺激的嗜中性白血球之肌動蛋白分布和控制組(僅以緩衝液處理)及對照組(100nM fMLP)明顯不同，因此我們可以推論Tγ會作用在嗜中性白血球之脂筏區域，和磷化硫脂分佈在同一區域，並因此造成細胞肌動蛋白分佈的變動，由於在免疫染色法上同時觀測到：受到Tγ刺激的的嗜中性白血球會有Rac/Cdc42 family的蛋白表現，因此進一步推論造成肌動蛋白聚集化之過程可能是透過Rac/Cdc42之訊號傳遞，所造成細胞骨架之變動。至於Tγ和脂筏的結合，我們則是藉由免疫覆蓋技術(immunooverlay)發現Tγ和磷化硫脂在體外(in vitro)會有鍵結之現象，且經由免疫遮蔽效應證實：若將細胞表面上的磷化硫脂以其專一抗體鍵結以遮蔽其效應，則由Tγ所引起的細胞毒殺率將隨所加之磷化硫脂抗體濃度增加而遞減。這可以解釋為何Tγ分佈的位置恰與磷化硫脂相似及其生理作用。總結而言，Tγ可能是藉由和磷化硫脂的鍵結和牽引，而坐落到嗜中性白血球的脂筏端上作用，進行毒殺細胞之後續動作，而在坐落到脂筏區之前後的時間點(兩者皆有可能)，引發Rac/Cdc42之訊號傳遞，造成胞內肌動蛋白之單體聚集(actin polymerization)造成嗜中性白血球之形變。