Abstract
從以往的文獻得知，無機焦磷酸水解酵素存在於菠菜的類囊體膜上。在本文中，我們首先將無機焦磷酸水解酵素由菠菜的類囊體膜上分離出，所用的清潔劑為濃度35mM的辛基葡萄糖□，藉由一連串的純化步驟，包括硫酸銨分段分離，羥磷灰石管柱柱層分析，酚基親和性管柱柱層分析，及蔗糖密度梯度分離法等。由類囊體膜所分離出的無機焦磷酸水解酵素，其專一活性由1.28單位提升至113 單位，活性提高90倍，而蛋白質的產量為3.87﹪。十二基硫酸鈉－聚丙烯醯胺膠凝體電泳的結果顯示，所純化出的無機焦磷酸水解酵素的分子量約56仟道爾吞。我們將此純化出的無機焦磷酸水解酵素與類囊體膜上之無機焦磷酸水解酵素作特性分析，比較結果發現幾乎沒有差異：其最適水解的條件在酸鹼值8.5 - 9.5 ；鎂離子為水解所必須的輔因子，且鎂離子與無機焦磷酸鹽的比例必須大於２才會有最高的活性；大部份的陰離子對無機焦磷酸水解酵素的水解活性沒有影響，但氟離子卻可完全抑制其活性；許多修飾劑，例如NBS,HNBB,DCCD,NBD-Cl，被用來檢視參與無機焦磷酸水解酵素活性的可能銨基酸的存在，結果發現只有NBS 的修飾會影響無機焦磷酸水解酵素的活性，至於究竟參與酵素活性的可能銨基酸是否有組織銨酸和半胱銨酸，則有待進一步探討。