Abstract
本人以菸草屬為材料，利用已發表之葉綠體基因組序列為基礎 (Nicotiana tabacum)，構築出其他三種菸草 (N.sylvestris，N.plumbaginifolia，n.otopnora)，葉綠體基因組相對於八種限制(AvaⅠ，BamHⅠ，BglⅠ，HindⅢ，PstⅠ，PvuⅡ，SalⅠ，X-hoⅠ) 的物理圖譜。實驗方法是先將葉片磨碎，以30%?60%不連續蔗糖濃度梯度溶液分離出葉綠體，然後再萃取出其中之去氧核糖核酸 (DNA)。經過適當限制 切割之後，用凝膠電泳加以分析，此為初步之結果。得到了限制 圖形之後，再配合電腦搜尋出已發表的基因組序列，即可找出變異點的精確位置，接著即可將凝膠中的 DNA轉置到nylon 膜上，同時另外找出適用的 DNA片斷，從凝膠中純化出來，以Nonradioactive DNA Labeling a-nd Detection Kit作標訓處理，製成探針，與前述之Nylon 膜進行雜交帶檢測實驗，最後用成色反應來看結果。除此之外，亦可用雙重限制 切割法作資料分析。從最後結果來看，N.sylvestrB 葉綠體基因組之限制 圖譜與野生種N.tabacum 完全相同，過去亦有報告指出N.sylvestris為N.tabacum 的母本，基於葉綠體母性遺傳的特徵，此一現象相當合理。至於N.plumbaginifclia 與N.tabacum 視緣關係較遠，同時亦有一片斷比N.tabacum 的大了約80個鹼基對。而N.otophora則最遠，因其物理圖譜差異最大。利用以上所述的實驗資料，吾人可進一步分析某些抗抗生素突變種其葉綠體基因組限制 圖譜的變化，並試著找出特定相關基因，深入探討，期能對抗生素之分子機轉有所了解。此外亦可用此四種圖譜作標準，鑑定出體細胞雜交種在經過葉綠體選分之後所殘留下來之 DNA種別。